慢病毒介导双自杀基因对乳腺癌细胞的体内杀伤作用.pdfVIP

2011年第38卷第4期 国肿 瘤植 181 基础研究 · 慢病毒介导双 自杀基因对乳腺癌细胞的体内杀伤作用 孔 恒 黄宗海① 陈海金① 陶霖玉 齐 柯 摘要 目的：研究慢病毒介导的KDR启动子驱动的胞嘧啶脱氨酶(CD)胸／苷激酶(TK)融合基 因系统 (FGW—KDRP—CDT／K) 对乳腺癌细胞的体 内杀伤作用。方法：培养乳腺癌MCF一7细胞，建立裸 鼠荷瘤模型。荷瘤后将裸鼠随机分为4组。I组：空 白对 照，荷瘤但不施加任何处理；II组：注射慢病毒与前药(5-FC+GCV)；111组：仅注射慢病毒；1V组：仅注射前药。观察肿瘤生长速度， 测量瘤体大小及重量；用RT—PCR法鉴定双 自杀基因在转基因瘤组织中的表达；取肿瘤组织进行HE及PCNA免疫组化染色；流式 细胞技术进行细胞周期检测。结果：第 Ⅱ组裸 鼠移植瘤的生长显著受到抑制，第 1、Ⅲ、Ⅳ组肿瘤生长情况无明显差异。经 RT—PCR检测发现转基因瘤组织有 目的基因的表达 与第 1组(空白对照组)相比，第Ⅱ组瘤组织的PCNA表达明显下调。流式 细胞仪检测细胞周期分析显示治疗后G．期细胞比率增多，G／M期细胞减少。结论：FGW—KDRP—CDT／K联合前药5一FC及GCV在 体 内可明显抑制移植瘤的生长，细胞周期阻滞，该作用可能与抑制PCNA表达有关。 关键词 乳腺癌 自杀基因治疗 慢病毒 细胞周期 增殖细胞核抗原 doi：10．3969／j．issn．1O00—8179．2011．O4．ool KillingEffectOfLentivirus．mediatedDoubleSuicideGenesonHumanBreastCancer CellsinvjyO HengKONG’，ZonghaiHUANG，HaijinCHEN，LinyuTAO。，KeQI。 Correspondingauthor：HengKONG，E—mail：generaldoc@126．corn DepartmentofBreastandThyroidSurgery，TheNanshanHospitalofShenzhenCity,Shenzhen518052，China ：DepartmentofGeneralSu~ery,ZhujiangHospitalofNan~ngMedicalUniversity,Guangzhou510282，China ThisworkwassupportedbyagrantfromtheNationalHighTechnologyResearchandDevelopmentProgramofChina(863Program)( No．2001AA217171) Abstract Obieetive：ToevaluatethekillingeffectoflentivirusmediatedCDT／K fusiongenecontrolledbykinaseinsert domain—containingreceptor(KDR)promoteronhumanbreastcancercellsinvivo．Methods：Nudemicewereusedashostsforcell lineMCF一7xenografistoestablishtheanimalmodelofbreastcancer．Thetumor-bearingmicewererandomlydividedinto4rgoups． Grouplwereblankcontrolswithutmor-bearingmicewithnorteatment．GroupⅡwasinjectedwithlentivirusandprodrugf5-FC+ GCV)．Group111wasinjectedwithlentivirus．GroupIVwasinjectedwithprodrug．Tumorgrowthrate，tumorsizeandweightwere observed．TheexpressionofdoublesuicidegenesinxenograflutmorswasexaminedbyRT-PCR．Theutmortissuew