牛病毒性腹泻病毒E2蛋白的多克隆抗体制备及鉴定.pdfVIP

第 33卷 第 3期 中 国 预 防 兽 医 学 报 VO1．33．No．3 2O11年 3 月 ChineseJournalofPreventiveVeterinaryM edicine Mar． 20l1 doi：10．3969j／．issn．1008—0589．2011．03．I5 牛病毒性腹泻病毒 E2蛋白的多克隆抗体制备及鉴定 高欲燃 1,2，朱远茂 ，康 健 ，史鸿飞 ，李 娇 ，任宪刚 ，冯军科 ，于 作 ·，薛 飞 t (1中 农业科学院哈尔滨兽医研究所 兽医生物技术国家重点实验室 ／大动物传染病研究室 ，黑龙江 哈尔滨 150001； 2．东北农业大学 动物医学学院，黑龙江 哈尔滨 150030；3．南京农业大学 动物医学院，江苏 南京 210095) 摘 要：为制备牛病毒性腹泻病毒(BVDV)重组E2蛋 白的兔源多克隆抗体 ，本研究利用表达BVDVE2蛋 白 的重组质粒 pET30a—E2转化 E．coliBL21(DE3)，经诱导表达获得重组E2蛋 白。Westernblot检测显示纯化蛋 白能 够与BVDV参考阳性血清反应。以纯化的重组E2蛋白免疫新西兰白兔制备多克隆抗体，病毒中和试验测定其中 和效价为 1：2048，间接免疫荧光和westernblot试验表明其具有 良好的反应性和特异性。本研究制备的BVDV重 组 E2蛋 白兔源多克隆抗体可应用于BVDV的检测，同时为进一步建立检测BVDVE2蛋 白的ELISA方法奠定基 扭 关键词 ：牛病毒性腹泻病毒 ；E2蛋白；多克隆抗体 中图分类号 ：$852．5 文献标识码 ：A 文章编号 ：1008—0589(2011)03—0227．05 PreparationandCharaCterizatiOnofantiseraagainstrecombinant E2proteinofbovineviraldiarrheavirus GAO Yu—ran，，ZHU Yuan—mao，KANG Jian，SHIHong—fei，LIJiao，REN Xian-gang， FENG Jun—ke，YuZuo，XUE Fei (1．DivisionofLivestockinfectiousDiseases，StateKeyLaboratoryofVeterinaryBiotechnology，HarbinVeterinary ResearchInstituteof ChineseAcademyofAgriculturalSciences，Harbin150001，China；2．CollegeofVeterinary Medicine，NortheastAgriculturalUniversity， Ha~in150030，China；3CollegeofVeterinary Medicine，NanjingAgriculturalUniversity，Nanjing210095，China) Abstract：TopreparethepolyclonalantibodyagainstrecombinantE2proteinofbovineviraldiarrheavirus(BVDV)in rabbits，E．coliBL21(DE3)wastransformedwiththerecombinantplasmidpET30a—E2．TherecombinantE2proteinwasexpressed inE．coliaftercultivationandinduction．ThepurifiedrecombinantE2proteincouldberecognizedbyspecificBVDV antiserain western blot．ThenthepurifiedrecombinantE2proteinwasusedasantigenforimmunizingrabbittopreparepolyclonalantibody ag