牛皮蝇幼虫抗原基因原核表达条件的优化.pdfVIP

牛皮蝇幼虫抗原基 因原核表达条件 的优化 娜仁 高娃 ，呼和 巴特 尔 ，王文龙 (内蒙古农业大学兽医学院，内蒙古呼和浩特 010018) 摘 要：分别对构建的3种牛皮蝇幼虫抗原 (HypoderminA，B，C)基 因重组表达 茵BL21(pETHA)、 BL21(pETHB)、BL21(pETHC)在不同的诱导时间、诱导剂浓度和诱导温度等条件下的表达情况进行 了研 究。结果表明，重组表达茵BL21(pETHA)、BL21(pETHB)、BL21(pETHC)最佳诱导时间均为4h，最佳诱 导剂浓度均为 0．05mmol／L，最佳诱导温度分别为 37、37、3O℃。研究结果为进一步获得大量重组抗原用于 牛皮蝇蛆病的血清学诊断和免疫防控研究提供 了依据。 关键词 ：牛皮蝇蛆病；牛皮蝇幼虫抗原；原核表达；表达条件优化 中图分类号 ：Q786 文献标识码 ：A 文章编号：1007—5038(2O11)O3—0032一O5 牛皮蝇蛆病 (Hypodermosis)是皮蝇的幼虫侵 学诊断的很好的候选抗原[8]。通过大肠埃希菌重组 人牛体内所引起 的一种寄生虫病 。该病除可寄生于 表达获得 目的蛋 白，一直是大量获取 目的蛋 白的一 牛体外，还可寄生于山羊、鹿、羚羊、马、啮齿动物等 种有效途径 ，然而不同的表达载体和不同来源的外 多种动物，还可感染人，是一种危害严重 的人兽共患 源基因在大肠埃希菌 中的表达特性也不 同，在大量 病。每年因牛皮蝇蛆病给畜牧业和皮革制造业造成 生产不同重组蛋 白之前都需要对重组表达系统的发 巨大的经济损失 。 酵条件进行优化以获取最佳的生产效益。本研究针 目前 ，国内外对牛皮蝇蛆病主要采用化学药物 对实验室中构建的3种牛皮蝇基因重组表达菌的培 防治，然而药物 防治方法存在药效时间短、副作用 养、诱导条件进行优化，为获得大量重组抗原用于牛 大、出现耐药性等诸多的弊端。解决这些问题 的有 皮蝇蛆病的血清学诊断和免疫防控研究提供依据。 效途径是研究牛皮蝇蛆病 的免疫防控方法。近年 1 材料与方法 来 ，随着相关学科科技水平 的进步和新 的研究手段 1．1 材料 的不断出现，促进了寄生虫疫苗研究的快速发展，并 1．1．1 菌株和质粒 重组表达菌BL21(pETHA)、 取得了大量的研究成果[1。]。 BL21(pETHB)、BL21(pETHC)由内蒙古农业大学 有关牛皮蝇蛆病 的免疫防控研究 已经有 了近 寄生虫实验室保存 。 40年的历史。早在 1970年，BoulardC等 就开始 1．1．2 主要试剂 LB培养基 、卡那霉素、IPTG、电 用纹皮蝇 I期幼虫虫体粗提胶原蛋 白制成抗原免疫 动物，来抵抗皮蝇蛆病的感染。在此之后 ，各国研究 泳级 SDS、丙烯酰胺、甲叉双丙烯酰胺 、甘氨酸、过硫 人员分别以牛皮蝇幼虫粗提抗原 、纯化抗原进行了 酸胺、考马斯亮蓝 R250、溴酚蓝 、DTT、TEMED、低 大量的抗原筛选、免疫机制和免疫 防控方面的研 分子质量蛋白Marker为宝生物工程 (大连)有限公 究[引。 1994 年，Moire N 等[7 从 纹 皮 蝇 司产 品。 (H．Lineatum)的I期幼虫中分离得到 4种保护性 1．2 方法 抗原候选基因，分别是 HypoderminA(HA)，Hypo— 1．2．1 诱导表达时间的优化 将保存于一80℃的 derminC(HC)和两种 HypoderminB(HB)相关蛋 重组表达菌 BL21(pETHA)、BL21(p