犬源环孢子虫的ITS-1序列鉴定.pdfVIP

中国人兽共患病学报 2011，27 (2) ChineseJournalofZoonoses 141 文章编号 ：1002—2694(2011)02—0141一O3 犬源环孢子虫的 ITS一1序列鉴定* 岳彩玲 ，李国清，程家林 ，高振永 ，朱海波 ，李 结 摘 要 ：目的 对犬粪中新发现的环孢子虫进行分子鉴定 。方法 在 GenBank中登录 的环孢子虫 18S和 5．8SrDNA序 列的保守区设计一对 引物 ITS-1+F／ITS一1+B，扩增犬源环孢子虫ITS一1+序列；将扩增产物纯化并连接到质粒载体 pMD19一 T，克隆转入感受态细胞 JM109，挑选 阳性克隆测序并进行相似性 比较和种类鉴定 。结果 犬源环孢子虫 ITS-1+序列长为 547bp，包含 58bp的18SrDNA序列，333bp的ITS一1序列和 156bp的5．8SrDNA序列。其 中的 18SrDNA和 5．8SrDNA与 艾美耳科原虫的相似性最大；其 中的ITS-1序列与人源环孢子虫、牛源环孢子虫、狒狒源环孢子虫均不相 同。结论 该犬源环 孢子虫可能为环孢子虫属 的一个新种。 关键词 ：犬源环孢子虫；内转录间隔区1；PCR；分子鉴定 中图分类号 ：R382 文献标识码 ：A M olecularidentification ofdog—derivedCyclosporasp．basedon ITS一1sequence YUECai—ling，LIGuo—qing，CHENGJia—lin，GAO Zhen—yong，ZHU Hai—bo，LIJie (CollegeofVeterinaryMedicine，SouthChinaAgriculturalUniversity，Guangzhou510642，China) ABSTRACT：ToidentifyoneCyalosporasp．from dogfeces。apairofprimersITS—l+F／ITS1+Bweredesignedtoam— plifytheITS-1+ regionoftheCyclosporalikespeciesfrom dogbyPCR amplificationbasedon thepublishedsequenceofthe rDNA geneofCyclosporainGenBank．TheampliconswerepurifiedandclonedintopMI19T vectorfollowedbybeingtrans— fectedintoJM109．ThepositivecloneswereculturedandidentifiedbyPCR amplification and theinsertwassuccessfullvse quenced．Theresultrevealedthattheampliconwas547bpinlength，including58bpof18SrDNA，333bpofITS一1and156bpof 5．8SrDNA．ThedogassociatedCyclospora—likeorganism belongstoEimeriidaebasedonthehighsimilarityofitspartial18S rDNA and5．8SrDNA andotherprotozoansofEimeriidae．Theorganism mightbeanew speciesbasedonitsspecificITS-1se quence． KEY WORDS：dogderivedCyclospora；ITS 1；PCR；molecularidentification 环孢子虫为人兽共患 的肠道致病性原虫 ，主要 来确定属的地位。但是 18SrDNA在属内种间高度 引起人和家畜的胃肠炎和慢性腹泻。虽然在国际上 同源 ，在种 的鉴定方面 ，多采用 ITS一1区 ]。本研究 关于环孢子虫 的分类仍然存在争议 ，_1]。除了人能 以犬粪 中发现的疑似环孢子虫卵囊为研究对象，对 够感染卡耶他环孢子虫 (C．