乳与乳制品中L（-）-羟脯氨酸含量的测定方法.pdfVIP

计《量与测试技术》202牟摹39卷第 期 乳与乳制品中L(一)一羟脯氨酸含量的测定方法 MilkandDairyProductsintheL(一)一methodfo，． DeterminationofHydroxyprofine 韩志平 (贵州省产品质量检验检测院，贵州贵阳550004) 摘 要：目的：改进乳与乳制品中动物水解蛋白鉴定一L(一)一羟脯氨酸含量测定法 (卫生部指定方法)。方法：在其前处理过程中用硫酸溶液代替氯 化亚锡盐酸溶液水解样品。用烘箱代替了水浴水解样品，改动了试样前处理和测定操作。方法的线性范围Ot,e,／n~～2．ot,e／n~，相关系数7一O．99993， 加标回收率为89．5％一101．O％。结论：该方法显色灵敏，稳定性好，准确，干扰少，适用于乳及乳制品中一L(一)一羟脯氨酸含量测定。 关键词：乳与乳制品；L(一)一羟脯氨酸；测定方法 1 前言 (4)显色剂：称取 l0．0g对二甲氨基苯甲醛，用35mL “皮革奶”是用皮革水解蛋 白生产出来的乳制品，加 高氯酸溶液E6o％(质量分数)]溶解，缓慢加入65mL异丙 人皮革水解蛋 白到乳制品中的目的是提高产品中蛋白含 醇。(用时现配) 量，皮革水解物是从皮毛中水解出的物质，能增加食品中 (5)L(一)一羟脯氨酸(C5H9No3)标准溶液。 氨基酸的含量但皮革水解物含有危害人体健康的重金属 标准储备液500t~g／mL：称取50．0mg／L(一)一羟脯氨 六价铬，不能用于食品加工。L一羟脯氨酸是胶原蛋 白 酸用少量水溶解，加一滴 3moL／L硫酸溶液，用水定容至 (皮革水解蛋白)特有的氨基酸，而牛奶中并不含此氨基 100mL容量瓶中。该溶液4℃以下可稳定存放 1个月。 酸，所以一般乳与乳制品中皮革水解蛋 白的鉴定，主要是 3．3 测定 通过对 L一羟脯氨酸含量的测定。通过对 L(一)一羟脯 (1)标准曲线的绘制：吸取标准储备液 5．00mL于 氨酸含量的测定，可判定是否为动物水解蛋白。 500mL容量瓶中，用水定容至刻度即得 5t~g／mL标准溶 2 原理 液。分别吸取该溶液0．O0，10．00，20．00，30．O0，40．OOmL 试样用硫酸于 105℃水解，过滤、稀释水解产物。羟 于100mL容量瓶中，用水定容摇匀。所得浓度分别为 脯氨酸经氯胺T氧化后，与对二甲氨基苯甲醛反应生成 O．O，0．5，1．0，1．5，2．Ot~g／mL。(用时现配)，取不同浓度 红色化合物，在波长 558nm处进行比色测定。 的上述溶液5．OOmL，分别加入25mL具塞试管中，加氯胺 3 材料与方法 T溶液2．OOmL，摇匀后于室温放置 20min。加入显色剂 3．1 仪器与材料 2．00mL，摇匀，用铝箔或塑料薄膜将 比色管封 口，迅速放 紫外可见分光光度计 (8453)、干燥箱(105℃ ±1oC)、 入6oc=【恒温水浴中加热20min，取出，用流动水冷却比色 三角烧瓶 (250IllL)、圆形滤纸、pH计、水浴锅 (60(3± 管3min，在室温下放置30min，用水作参比，在波长 558nm 0．5cI=)、比色皿 10mm、分析天平 (0．0001g)、容量瓶 处测定吸光值，绘制标准曲线 (以浓度为横坐标，吸光值 (250mL)、表面I11t(5cm 6cm)、铝箔或不透明塑料薄膜。 为纵坐标)。 3．2 试剂 (2)样 品的测定：称取 8g试样 (精确至 0．Olg)于 (1)硫酸溶液Ec(H2S