PCR仪器介绍及常见问题 .pdf

各款荧光定量PCR 仪的性能比较 ABI5700，ABI7700，ABI7000，ABI7300，ABI7500，MJ opticon，MJ opticon2，bio-rad ICycler， LightCycler1.5，roter-gene3000，Stratagene Mx3000P，line-gene 等等。这种仪器各有各的特 点，但都存在不足之处。 ABI 公司的荧光定量PCR 仪产品比较多，成系列，但目前而言ABI5700 和ABI7700 不能实时在线地检 测荧光，因而已经退出历史舞台，尤其是 ABI7700，不但很贵，而且采用苹果机电脑，使用很不方便。 ABI7000 目前也已经淘汰，我用的这台仪器老出问题，曲线极不光滑，但同样的反应体系在国产机杭州 博日line-gene 上曲线非常好，在ABI7500 上曲线也很光滑，所以，本人估计是ABI7000 设计上有不 足之处。而且卤钨灯特别容易坏，在南方，我们实验室平均5 个月换一个，配件容易坏，后续使用成本就 会高一些。 现在市场上的ABI7300 就是ABI7000 的简单升级版，硬件设计上几乎没有改变，只是换过几个性能更 好的配件，软件有所升级。 另外我个人感觉ABI7900 （ABI 公司第二代产品）有些华而不实，价格应该是所有荧光定量PCR 仪中最 贵的，硬件上跟ABI7700 差不了太多，但性能指标还不如ABI7500 （ABI 公司第三代产品），硬件设 计上也不如ABI7500 合理。所以这个型号的仪器，谁买了，用的时候会不呼上当。 ABI7500 是ABI 公司最成功的产品，各方面性能都不错，虽然加热模块还是有一些边缘效应，但使用中 央的孔位效果可以得到保证，在96 孔板使用中间的48 个孔位，结果都能得到保证。 总的来说，ABI 公司在荧光定量领域上还是做出很多贡献的，其仪器在科研上还是可以用的，但由于硬件 设计上的缺陷，需要额外的ROX 染料进行校正，并且占用了一个检测通道。国内的试剂厂商都不加ROX 染料，科研用户一般也不使用，所以其检测的准确性和重复性还是很难保证的，尤其浓度较低的模板进行 检测时效果不佳，偏差会很大。 罗氏Roche 的LightCycler 以运行速度快而著称，在国内市场占有率最高，其设计保证了临床诊断的准 确性，又充分考虑了科研功能。但本人最初使用时老出问题，有时候阳性曲线做不出来，后来发现这跟其 独特的毛细管设计有关系，因为毛细管很细，所以反应液在毛细管中的对流交换非常不畅，没有充分混匀 时就加入毛细管会影响反应的进行，当然，热启动酶就不会有这方面的问题了。所以本人在操作时都特意 将反应液混合充分后再加入毛细管，这样在后来的实验中就没有出现过问题。 本人开始使用罗氏的仪器时最怕毛细管断裂，操作时特别担心，熟练以后，规范使用随机赠送的操作配件， 也没见毛细管断过。而且最重要的是，罗氏的仪器稳定性非常好，灵敏度明显比其它仪器高，这也许跟毛 细管和其检测元件有关系，检测重复性也非常好，所得定量结果可信度高。本人所使用的罗氏 LightCycler1.5 三四年了也没出现硬件的故障。 另外，采用毛细管最大的优点恐怕就是可以大量节省成本，因为目前只有毛细管这种反应装置才可以采用 10uL 的反应体系而不影响试剂的检测灵敏度和稳定性，这样大大地节省了试剂的成本。同样用普通PCR 反应管进行10uL 体系的荧光定量实验，效果很差，而且明显灵敏度下降，检测结果不稳定。 罗氏公司 Roche 推出的 LightCycler2.0 在原有基础上检测通道增加到六个，软件功能也更加丰富。据 说最新推出的 LightCycler480 是目前全球最先进的荧光定量 PCR 仪，突破了传统技术的瓶颈，推出了 不具边缘效应的高通量荧光定量PCR 仪。具体没有用过，听说使用非常灵活。 MJ 的仪器总体上而言比较稳定，但检测灵敏度不高，功能单一，检测通道不多，运行时间太长，一般一 次实验要两个多小时。所谓的温度梯度功能在荧光定量 PCR 平台上一点用处都没有，这主要是由该技术 的原理决定的，所以这个功能只是作秀了。 伯乐的ICycler 仪器也许是设计上的缺陷还是什么原因，同样的反应体系，在该仪器上进行实验时，阳性 样本的扩增曲线荧光增量比较低，检测效果不好，所以在全国很少用户使用该仪器。伯乐的荧光定量PCR 仪目前在国际上仍属低端产品，返修率太高。 Line-gene 仪器的使用比较方便，但返修率较高，不过厂家就在国内，售后服务非常及时。 roter-gene3000 跟罗氏公司的LightCycler 有很多相似之