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§2.2 激光拉曼光谱仪  一、光源 1.激光光源的特性 激光光源的优点 二、样品装置 1. 样品装置的作用： 是使激光聚焦在样品上，从而对样品进行照射及收集拉曼散射   三、单色器 四、检测与信号处理系统   2.多道探测 3.CCD检测装置 A.CCD简介 CCD检测器是一种结合数字信号处理技术构成的多道光信号检测装置。它是基于金属－氧化物－半导体(MOS) 技术的光敏元件, 其检测原理为聚集在势阱中的光生电荷量与入射光强度和积分时间有着线性的关系。它有两种基本类型: 一种是电荷包存贮在半导体与绝缘体之间的界面, 并沿界面传输(表面沟道CCD) ; 另一种是电荷包存贮在离半导体表面一定深度的体内, 并在半导体体内沿一定方向传输(体沟道或埋沟道CCD) B. 基本原理 CCD 的基本功能是电荷的存贮和电荷的转移, 因此,CCD 的基本工作原理是信号电荷的产生、存贮、传输和检测。  2.2.2傅立叶变换拉曼光谱仪 色散型拉曼光谱仪大都采用可见光作激发光源和透散光栅分光得到拉曼光谱。  早期傅立叶变换拉曼光谱仪存在主要的问题 傅立叶变换拉曼光谱仪与色散型拉曼光谱仪完全不 同，它主要由以下几个部分组成：   目前在国内常见的几种傅立叶变换拉曼 光谱仪有以下几种：   （1）由于采用近红外激光激发，可避免荧光干扰，扩大Raman光谱的应用 范围，有很高的信噪比。 FT-Raman光谱的缺点 （3）水对近红外光有吸收，它影响了FT-Raman光谱仪测量水溶液的灵 敏度。可用重水溶解样品，以减少对近红外光的吸收。 傅立叶变换拉曼光谱的应用 2.2.3 共焦显微拉曼光谱仪 1. 主要组成 激光器作为单色光源，有可见光和近红外激光器，以及紫外激光器可供选择；能抑制瑞利散射，有高效透过拉曼信号的全息滤光片；二维CCD探测器，能够在可见和近红外区进行有限噪声关闭检测；计算机数据处理系统和探头等。  3.共焦显微拉曼光谱仪的应用 共焦显微拉曼光谱（CRM）的灵敏度和空间分辨率能让我们得到高质量单细胞和染色体的非共振拉曼光谱图，可以进行生物组织切片的激光拉曼扫描，从而得出样品在不同深度的拉曼光谱。在这方面的应用有：癌症的早期诊断；以及皮肤各层组织的分子浓度分布和药物分子对其渗透作用的体内无损检测。 2.共焦拉曼显微拉曼光谱仪基本原理 A.激光可经由物镜聚焦成单一的光点来照射样品特定深度的某一点（光斑半径约为1μm）； B.拉曼散射光经由物镜聚焦成单一的光束，完全通过CCD前的狭缝； C.其他在焦点之上及之下的非焦点所产生的背景散射在狭缝周围被阻挡下来。 共焦拉曼显微拉曼光谱仪动画演示说明 手臂（左）和手掌（右）角质层组织的体内检测结果：左纵坐标为水和蛋白质的信号强度比；右纵坐标为水的质量百分比 * * 2.2.1 色散型激光拉曼光谱仪 2.2.3 共焦拉曼显微拉曼光谱仪 2.2.2 傅立叶变换拉曼光谱仪 色散型拉 曼光谱仪 光源 样品装置 单色器 信号处 理系统 2.2.1 色散型激光拉曼光谱仪 外光路 样品池 激 光 器 单 色 器 检测和 记录系统 图： 激光拉曼光谱仪示意图 A 强度不高，需要长时间照射样品，对光敏性样品不利 B 汞线较宽，单色性差，无法进行高分辨光谱的测量 C 汞灯发散角大，不能很好聚焦，方向性差，无法进行微量分析和单晶光谱的测量 在激光光源出现之前，使用最广泛的是汞孤灯， 汞孤灯的缺点是： A 强度高，能量在空间和时间高度集中，测定时间缩短 C 方向性好，发散角极小，光束可以聚焦到很小的面积（10-5—10- 6cm2），可对极微量样品（0.05μg）和单晶进行测量 D 偏振性好，便于进行退偏振比的测量，提供物质结构对称性和振动对称性的信息 B 单色性好，线宽窄，拉曼光谱谱峰尖锐，分辨率好，容易进行高分辨光谱测量 2.常用的激光光源 He - Ne 激光器 ，氩离子激光器，氪离子激光器,某些固体激光器以及染料激光器。 气体激光器 在输出激光谱线的同时，还伴有自发辐射产生的等离子线。强度比激光小几个数量级，比拉曼线强1—2个数量级，是杂散光的来源之一，干扰拉曼光源的测量，故需要滤光单色器即前置单色器。 He - Ne 激光器 输出波长为632.8nm，输出功率在100mW以下，使用寿命1500小时 氩离子激光器 有多谱线输出，功率高，稳定性好，常用的谱线 488.0nm和514.5nm，使用寿命1000小时。 氪