地高辛随机引物法标记探针的Southern杂交技术优化.pdfVIP

中国农业科技导报 , 2009 , 11 (4) : 123 - 128 Jou rnal of A gricu ltu ral Science and Technology 地高辛随机引物法标记探针的 Southern 杂交技术优化 1, 2 1 1 2 1 周长发 , 　张 　锐 , 　张 　晓 , 　罗淑萍 , 　郭三堆 ( 1. 中国农业科学院生物技术研究所 , 农作物基因资源与基因改良国家重大科学工程 , 北京 100081; 2. 新疆农业大学农学院 , 乌鲁木齐 830052) 摘 　要 :为检测转基因抗虫棉中的 B t C ry 1A 基因的表达 ,采用地高辛随机引物法标记探针 、化学发光检测的 Sou thern杂交技术 ,通过纯化探针 、使用最适探针浓度 、优化真空转印、杂交及免疫检测方法等一系列优化过 程 ,最终得到背景低 、信号强的 Southern杂交结果 。 关键词 :地高辛 ;化学发光法检测 ;转基因作物 中图分类号 : Q781　　　文献标识码 : A 　　　文章编号 :(2009) 040 12306 Technolog ica l Im provem en t of Southern B lot U sing D igox igen in labeled Probes w ith Random pr im ed M ethod 1, 2 1 2 2 1 ZHOU Zhangfa , ZHAN G Ru i , ZHAN G X iao , LUO Shu p ing , GUO Sandu i ( 1. B iotechnology R esearch In stitute, N ational Key Facility of Crop Gene R esources and Genetic Imp rovem ent, Ch inese A cademy of A gricu ltural Sciences, B eij ing 100081; 2. X inj iang A gricu ltural U n iversity, College of A gricu ltu re, U rum qi 830052 , Ch ina) A b stract: Sou thern b lot u sing digoxigen in (D IG) labeled p robe s w ith random p rim ed m ethod and chem ilum inescent detection was u sed to detect B t C ry 1A gene of tran sgen ic in sectresistant cotton. A serial of p rocedu re wa smodified by p urifying the D IGlabeled p robes, u sing op tim um p robe s concentration, imp roving the p roce ss of vacuum tran sferring, hyb ridization and imm unoa ssay. F inally, we ach ieved good Southern b lot re su lt w ith low background and h igh sen si tivity. Key wo