日本囊对虾中四种新型凝集素的特性的研究.pdf

博士后出站论文 摘 要 凝集素是一种重要的模式识别因子，在无脊椎动物先天性免疫应答中发挥着 识别异己和清除病原的重要作用。本文在实验室前期工作的基础上，对日本囊对 虾中四种同源性很低的凝集素的特性和功能进行了研究，以期进一步揭示无脊椎 动物如对虾中的先天性免疫机制，并为水产养殖中对虾的病害防治工作提供理论 基础。 通过重组表达，包涵体复性纯化得到四种具有凝集活性的凝集素(MjLees， 以识别不同糖，并且它们识别的糖谱存在显著差异。红血球凝集试验显示，它们 对包括小鼠、兔、人A、B、O型血细胞在内的6种哺乳动物红血球均有不同的 凝集效果。我们进一步对MjLecs的细菌凝集活性进行了分析，结果发现它们可 以凝集多种微生物，并且可以凝集的细菌种类各不相同，它们对3种对虾致病菌 也表现出不同的凝集活性。由此可以推测这四种MjLecs在日本对虾预防细菌性 感染的过程中可能发挥着重要作用，并且可以通过特异性的识别某些病原微生物 而协助宿主防御外源病害。 在实验室的前期工作中，四种凝集素均是由WSSV病毒的结构蛋白和一种 已报道的WSSV侵染宿主细胞上受体的N端区域片段蛋白从对虾的噬菌体展示 库筛选出来的，由此可以推测这四种凝集素与WSSV侵染宿主存在某种联系。 本文首先采用ELISA和Far-westernblot实验证实了这四种凝集素可以与病毒粒 子具有结合作用。体外实验研究了四种凝集素对荧光标记的WSSV侵染日本囊 主具有抑制作用，而MjLecC和MjLecD作用效果不明显。凝集素抗病毒活性的 发现，为进一步揭示对虾等无脊椎动物防御外源病害的免疫机制提供了理论依 据，并为将来使其应用于水产养殖业防御病毒性疾病提供了有利的理论基础。 此外，我们采用流式细胞仪分析了这四种凝集素对小鼠腹腔巨嗜细胞吞噬功 能的调理作用。实验结果表明，在四种凝集素中，MjLecC的调理作用最强，可 以明显促进小鼠巨噬细胞对荧光微球的吞噬能力。而其他三种凝集素的调理作用 不明显。同时，我们尝试了采用流式细胞仪分析外源异物(包括荧光微球、荧光 标记的大肠杆菌、副溶血弧菌和WSSV病毒)对对虾血细胞的影响。 博士后出站论文 在克隆MjLecA的过程中，我们发现多个具有个别氨基酸差异的MjLecA序 列，提示在包括日本囊对虾在内的无脊椎动物，为了弥补缺少的获得性免疫系统， 有可能存在多种序列差异和功能差异的凝集素来特异的识别外源异物，进而引起 宿主的一系列免疫防御机制。 关键词：日本囊对虾；凝集素；模式识别因子；功能多样性；对虾白斑杆状病毒 博士后出站论文 Abstract Lectinsareall of patternrecognition importantfamily asail roleinnon-self and clearanceininnate important recognizationpathogen atthe ofcharacteristicsand immune ofinvertebrates．Thisaims study system paper to ilnlTlunemechanismin ofthefourlectinsin inorder the functions shrimp explore invertebratesand the ofthe diseases． helppreventionshrimp thecDNA of structural library Marsupenaeusjaponicususing Biopanning