BmCPV多角体蛋白对异源蛋白的包埋.pdfVIP

BmCPV 多角体蛋白对异源蛋白的包埋 张轶岭，孟祥坤，潘中华，郑小坚，曹广力，薛仁宇，贡成良*2 （苏州大学基础医学与生物科学学院，江苏苏州 2 15123 ） 摘要 为了探索家蚕质型多角体在体内对蛋白的包埋特性，对从从患病家蚕 肠纯化的 BmCPV 蛋白进行液相色谱- 串联质谱分析，共鉴定了28 种蛋白质，其 5 种蛋白质BmCPV 编码，23 种蛋白质来自宿主家蚕，显示宿主蛋白可 以被包埋进BmCPV 的多角体 。结构分析显示，被包埋的宿主蛋白的结构与多角体蛋白的结构或病毒结构蛋白VP3 的N 末端结构有相似之处；将多角体蛋白基因克隆pIZT/V5-his ，转染BmN 细胞后通过抗生素Zeocin 筛选获得稳定 表达多角体蛋白的细胞株。荧光显微镜观察发现，转化细胞有轻度的病理变化，细胞质 有多角体蛋白结晶；纯化 的多角体经串联质谱分析，发现有2 种蛋白来自培养细胞， 异源蛋白的结构发现，其三维结构均与BmCPV 多角体 蛋白的左手结构很相似；对以修饰型线性家蚕杆状病 BmPAK6 感染稳定转化细胞，96 h 后纯化多角体，回复感染 结果显示，质型多角体蛋白能包埋BmPAK6 ；纯化的多角体及多角体裂解液能使X-gal 显色，表明BmPAK6 表达β 半乳糖苷酶能被质型多角体包埋。因此，可以认为 BmCPV 多角体蛋白可以包埋宿主细胞蛋白、也可包埋异源病 粒子。 关键词 家蚕质型多角体病 ；多角体；蛋白；包埋；串联质谱 家蚕细胞质型多角体病 （Bombyx mori cytoplasmic polyhedrosis virus, BmCPV ）属于呼肠孤病 [1] 科，质型多角体病 属 ，是家蚕病 病的主要病原体之一。基因组由10 个节段线性双链核糖核 [2] 酸 （dsRNA ）组成 。该病 的典型特征是病 粒子通常包埋在称作多角体的蛋白质晶体结构 。 多角体蛋白是由最小的基因组片段S10 编码，分子量大约为28 kD 。在病 垂直传播过程 ，多角 [3, 4] 体的重要作用之一是在多变的外界环境 有效保护内部包埋的病 粒子 。当pH 值大于10.5 时多 [5] 角体被裂解 。 目前，BmCPV 多角体蛋白对病 粒子包埋的分子机制还不是很清楚。Payne 和Mertens 推测， [6] 在病 和多角体蛋白之间有一种特殊的识别作用，它可以引起蛋白的组装和结晶 。Ikeda K 等利用 重组杆状病 在昆虫细胞中共表达 BmCPV VP3-GFP 融合蛋白和 BmCPV Polh 蛋白，结果发现， BmCPV 多角体蛋白可以对VP3-GFP 嵌合蛋白进行包埋，推测BmCPV 多角体蛋白与VP3 之间具有 特异性相互作用，VP3 的存在促使了BmCPV 多角体多角体对病 粒子的包装；VP3 的N-末端42-93 区域的52 个氨基酸残基是与多角体蛋白的N 末端H 1 α螺旋氨基酸残基相互作用的信号序列，将这 种信号序列同外源蛋白基因融合，当与多角体蛋白基因共表达时，外源融合蛋白能够被包埋进多角 基金项目：江苏省自然科学基金(BK2009 117) , 国家自然科学基金, 江苏省“六大人才高峰”项目(2009-D-Ag18), 苏州市自然科学 基金(YJG0907), 苏州大学重大应用研究培育(Q3134991)资助项目 作者简介：张轶岭，女，河北.，博士研究生，主要从事家蚕分子生物学研究，E-mail: zhangyiling008@126.com *通讯作者，Tel/Fax: 0512 gongcl@ 172 体[7, 8] 已有的研究结果显示，BmCPV 的多角体蛋白可以在没有其它病 因子的存在下自动组装成多 [3] 角体蛋白