CRBP1基因RNAi慢病毒载体的构建与鉴定.pdfVIP

维普资讯 南 通 大 学 学 报 (医 学 版 ) · 468· JournalofNantongUniversity (MedicalSciences)2007：27(6 [文章编号]1000—2057(2007)06—0468—03 CRBP一1基因RNAi慢病毒载体的构建与鉴定 1,2陈 波 ’，李建平，戴 途，昊志勇，罗 蒙，孙勇伟 (上海交通大学附属仁济医院普通外科，上海 200127；南京医科大学附属无锡第二人 民医院肝胆外科) 【摘 要】 目的 构建大 鼠视黄醇结合蛋 白一l(cellularretinol—bindingprotein—I，CRBP一1)基因RNAi(RNAinterfer- ence，RNAi)慢病毒载体 。方法：针对 已经筛选确定的大 鼠CRBP一1基 因RNAi有效靶序列 ，合成靶序列的OligoDNA。 退火形成双链 DNA，与经 HpaI和XhoI酶切后 的pGCL-GFP载体连接产生短发卡 RNA慢病毒载体 ，PCR筛选 阳性克 隆，测序鉴定。结果：PCR鉴定与DNA测序证实合成的含 CRBP-1shRNA慢病毒载体寡核苷酸链插入正确。结论：成功 构建大鼠CRBP一1基因RNAi慢病毒载体。 关【键词】RNA干扰 ；视黄醇结合蛋 白一1；慢病毒 【中图分类号】 Q78 文【献标识码】A Constructionandidentiffcation oflentiviralvectorofRNA interferenceofCRBP-1gene 2CHENBo， ，Jianping，2DAITu，et (DepartmentofGeneralSurgery，RenjiHospital，ShanghaiJaotongUniversity， Shanghai200127) [Abstract] Objective：ToconstructalentiviurlvectorofRNAinterference (nNAi)ofrutcellularretinol-bindingproteinI (CRBP—I)gene．Methods：TheeffectivesequenceofsiRNAtargetingCRBP—Igenewasconfirmedinourpreviousstudy．The complementaryDNA containingboth senseandnatisenseOligoDNA ofthetargetingsequencewasdesigned，synthesizednad clonedintothepGCL-GFPvector，toconstructalentiviralvectorwhichexpressedshorthairpinRNA (shRNA)，anditwasi- dentified by PCR nad DNA sequencing．Resul~：PCR identification and DNA seuq encingdemonstrated htatinsertion of oligonucleotideofhtelentivirusRNAivectorcontainingCRBP-IshRNA wasright．Conclusion：Th elentivirusRNAivectorof ratCRBP-1wasconstructedsuccessfully． K【eywordsl RNAinterference；Cellularretinol-bindingproteinI；Lentivirus 肝星状细胞 (hepaticstellatecells．HSC)的激活 CL—GFP载体，pHelper1．0(gag／pol元件)载体，Helper 过程是肝脏胶原产生和肝纤维化形成的中心环节[1]． 2．0(VSVG元件)载体三质粒组成 。其 中