microRNA-1254调控血红素氧化酶1表达的机制的研究.pdfVIP

microRNA-1254 调控血红素氧化酶 1 表达的机制研究 李成刚，戚新明，任进 中科院上海药物研究所药物安全评价中心 摘要 microRNA 主要的作用方式是通过在胞浆中结合于靶基因的 3’非翻译区 （3’UTR ），使靶基因 mRNA 翻译抑制或者降解。在我们的研究中，通过 Target Scan 数据库预测，发现 miR-1254 能够结合于血红素氧化酶 1 （HO-1 ）的3’UTR 。 将 miR-1254 的模拟物或者它的抑制剂（Anti-miR-1254 ）转入A549 细胞中能显 著降低或者加强HO-1 蛋白的表达，但 3 ’UTR 萤光素酶活性实验显示，miR-1254 对 HO-1 的 3’UTR 萤光素酶活性的抑制作用较弱。在此基础上，依据 miR-1254 显著下调 HO-1 蛋白表达水平的现象，我们进一步采用生物信息学技术，发现 HO-1 的启动子区同样具有miR-1254 的结合位点。应用含有HO-1 启动子的萤光 素酶载体，发现 miR-1254 能够强烈的抑制 HO-1 启动子活性，此结果也被实时 定量荧光 PCR 方法证实。miR-1254 的亚细胞定位分析发现， miR-1254 能同时 定位在细胞浆及细胞核中；而染色质免疫共沉淀方法则进一步显示，miR-1254 能够减少 RNA 聚合酶 II 在 HO-1 启动子区的富集。综上所述，本研究发现 miR-1254 不仅能够结合于靶基因的 3’UTR 而且能结合于靶基因的启动子区发挥 基因沉默的作用。这是一种新的 microRNA 调节基因表达的模式。 关键词：microRNA ，HO-1 ，转录调控，转录后调控  Mechanism of miR-1254-mediated HO-1 expression regulation Chenggang Li,Xinming Qi, Jin Ren Center for Drug Safety Evaluation and Research,Shanghai Institute of Materia Medica, Chinese Academy of Sciences ABSTRACT Recent studies have shown that microRNA regulates gene expression by repressing translation or directing sequence-specific degradation of complementary mRNA in the cytoplasm. In this study，we found a target site of miR-1254 in the 3’ untranslated region(3’UTR) of heme oxygenase-1(HO-1) with Target Scan. miR-1254 mimics and its antigomir (Anti-miR-1254) markedly repressed and increased HO-1 expression in A549 cells respectively. However，miR-1254 only moderately reduced the luciferase activity of HO-1 3’UTR, indicating other mechanism is involved in the effect of miR-1254. Bioinformatics analysis showed a miR-1254 target site in the promoter of HO-1. Luciferase assay also proved that miR-1254 strongly decreased HO-1