原创力文档- 1、原创力文档（book118）网站文档一经付费（服务费），不意味着购买了该文档的版权，仅供个人/单位学习、研究之用，不得用于商业用途，未经授权，严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等，侵权必究。。
- 2、本站所有内容均由合作方或网友上传，本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺！文档内容仅供研究参考，付费前请自行鉴别。如您付费，意味着您自己接受本站规则且自行承担风险，本站不退款、不进行额外附加服务；查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档，您可以点击 这里二次下载。
- 3、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等，请点击“版权申诉”（推荐），也可以打举报电话：400-050-0827(电话支持时间：9:00-18:30)。
- 4、该文档为VIP文档，如果想要下载，成为VIP会员后，下载免费。
- 5、成为VIP后，下载本文档将扣除1次下载权益。下载后，不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们。
- 6、成为VIP后，您将拥有八大权益，权益包括：VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
- 7、VIP文档为合作方或网友上传，每下载1次， 网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等，对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档
查看更多
pdf原文日本脑炎病毒e基因抗原域的克隆及高效表达.pdf
南京农业大学学报 2004 , 27 (4) : 77～80
Journal of Nanjing Agricultural University
日本脑炎病毒E 基因抗原域 Ⅲ的克隆及高效表达
1 1 ,2 1 1 1 1
郑其升 , 杨松 , 徐学清 , 曹瑞兵 , 陈德胜 , 陈溥言
( 1 南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室 , 江苏 南京 210095 ;
2 沈阳农业大学畜牧兽医学院 , 辽宁 沈阳 110161)
摘要 : 根据 GenBank 公布的日本脑炎病毒 ( Japanese encephalitis virus , J EV) SA14142 减毒株的核苷酸序列 , 设计并合成一
对特异性引物 , 应用 RTPCR 方法扩增出编码J EV 囊膜蛋白抗原域 Ⅲ的基因 ( EⅢ) , 将其连接入pMD18T 载体 , 经测序后
克隆入原核表达载体pET32a ( + ) , 构建原核表达载体pETEⅢ 。阳性质粒转化感受态大肠杆菌BL21 (DE3) , 经 IPTG 诱
导 , J EV EⅢ基因获得表达 , 经细胞定位分析 , 目的蛋白以包涵体的形式存在于大肠杆菌中。通过改变IPTG 的浓度和诱
导时间 , 确定了表达 EⅢ蛋白的最佳诱导条件 : IPTG终浓度为 01 mmol ·L - 1 , 诱导时间为 3 h 。在大肠杆菌中的最高表达
量占菌体总蛋白的 549 % 。Westernblot 分析表明表达产物具有良好的免疫学活性。利用纯化的表达产物作抗原包被酶标
板 , 可以明显地区分J EV 阴、阳性血清 , 并且不与猪伪狂犬病病毒、猪圆环病毒、猪呼吸与繁殖障碍综合征病毒、猪细
小病毒、猪瘟病毒的阳性血清发生反应。结论 : 重组J EV EⅢ蛋白可以用于检测猪血清中J EV 抗体水平。
关键词 : 日本脑炎病毒; 囊膜蛋白 ; 克隆 ; 原核表达
中图分类号: S8524 + 3 文献标识码 : A 文章编号 : 1000 2030 (2004) 04 0077 04
Cloning and expression in E . coli for the domain Ⅲof the
envelope protein gene of the attenuated SA14142 strain
of Japanese encephalitis virus
ZHENG Qisheng1 , YANG Song1 ,2 , XU Xueqing1 , CAO Ruibing1 , CHEN Desheng1 , CHEN Puyan1
( 1Key Laboratory of Animal Disease Diagnosis and Immunology , Ministry of Agriculture ,
Nanjing Agricultural University , Nanjing 210095 , China ; 2College of Animal
文档评论（0）