WT1基因启动子和增强子在不同细胞株中的转录活性研究_胡绍燕.pdfVIP

# 1050# 中国实验血液学杂志 Journ l o f Expermi ent l Hem tology 2007; 15 (5 ): 1050 - 1055 ( A rt ic le ID): 1009- 2 137 ( 2007) 05 - 1050 - 06 # # WT1 * 胡绍燕 , 陈子兴, 赵晔, 岑建农, 谷敏, 傅铮铮, 何军, 顾伟英 苏州大学附属第一医院江苏省血液研究所, 苏州2 15006 本研究探讨WT 1基因启动子和增 子在不同细胞株中的转录活性, 为开展基于 WT1基因调控的白血病 基因治疗奠定基础以 EGFP做报告基因, 构建含有WT 1基因启动子和增 子的重组表达载体; 利用脂质体和电 穿孔技术将重组质粒转染 13 个细胞株, 包括WT 1基因高表达的白血病细胞株 ( K562NB4TH P-1SH I-1), WT1基 因低表达的白血病细胞株( U937和 Jurk t); 非造血细胞株中WT1基因高表达的 MCF-7T47D293 株细胞和WT 1 基因低表达的 ECV 304SMMC7721HT-29SHG44细胞株; 利用流式细胞术检测转基因细胞稳定表达 EGFP 的平均 荧光 度以平均荧光 度代表启动子和 ( 或) 增 子的转录活性结果表明: 通过基因重组技术构建了含有 WT 1基因启动子的表达载体 pEW P, 以及含有WT 1基因启动子和增 子的表达载体 pEW PA就启动子的转录活 性而言, 在非白血病细胞株中, ECV 304细胞 EGFP 的平均荧光 度最高, 是空载体( pEGFP-1) 的 16. 54 ? 2. 45倍, 明显高于白血病细胞株 (p 0. 05); M CF-7和 SHG44细胞次之, 分别为 9. 46 ? 1. 10和 7. 29 ? 0. 73倍, HT-29细胞表 达最低, 仅为 0. 99 ? 0. 02倍在人类血病细胞株中, K562细胞 EGFP 的平均荧光 度最高, 是空载体 pEGFP-1的 2. 93 ? 0. 27倍, 明显高于 Jurk t和 SH I-1细胞株(p 0. 05) 后二者分别为 0. 74 ? 0. 03和 0. 84 ? 0. 09倍pEW PA 可以使 HT-29SH I-1和 K562细胞中WT 1基因启动子的转录活性增 , 分别增 到 4. 813. 06 和 1. 01倍结论: WT 1基因启动子的转录活性与细胞内在WT 1基因的表达水平不相关, 增 子增 部分细胞株中WT1基因启动子 的转录活性, 但不具有造血组织特异性 WT1基因; WT1基因启动子; WT1基因增 子; 平均荧光 度; 白血病细胞株; 造血组织特异性 R733. 7 A T ranscrip tiona l A ctiv ity of W T 1 G ene Prom oter and Enhancer in D iverse C ell L ines * HU Sh o-Y n , CHEN Z i-Xing, ZHAO Ye, CEN Ji n-Nong, GU-M in, FU Zheng-Zheng, HE Jun, GU W ei-Ying J i ng su In stitute o fH em tology, The F irst Affili ted H ospit l of Suzhou Un iversity, Suzhou 215006, Ch in Ab stract The objective of study w s to investig te tissue-specific tr n scription l ctivity of W T 1 (W ilm s tum or gene) prom oter nd enh ncer