WT51农残速测仪检测技术要点.docVIP

WT-51型农残速测仪检测技术要点及注意事项 龚亚茹 (汉中市农产品质量安全监测检验中心，陕西汉中,723000) 摘要：介绍农残速测仪检测原理、方法要点以及使用的注意事项，为农药残留检测工作者提供参考。 关键词：农残速测仪；蔬菜；检测原理；速测方法；注意事项 农产品生产中，农药对病虫害的防治发挥着十分重要的作用，而残留在农产品中的农药又威胁着人民的身体健康，为杜绝农药残留超标的农产品流入市场，加强农残的快速检测已成为农产品日常监管的重要抓手。2010年我省农产品质量安全监管局给各市农检中心统一配送了WT-51农残速测仪，也是2011年全省首届农产品质量安全基层检测技术人员大比武指定速测仪器。通过3a来的实际检测，我们熟练掌握了该仪器的操作方法，并积累了一些经验，在此与农残检测工作者们交流。 1 检测原理 WT-51型农残速测仪检测原理是采用酶抑制率法。在一定条件下，有机磷和氨基甲酸酯类农药能抑制乙酰胆碱酯酶的活性，其抑制率与农药浓度呈正相关，正常情况下，酶催化神经传导代谢产物（乙酰胆碱）水解，其水解产物与显色剂反应，产生黄色物质，用分光光度计在412nm处测定吸光度随时间的变化值，计算出抑制率，通过抑制率的大小可以判断出样品中是否有高剂量有机磷或氨基甲酸酯类农药的存在。 2 农残速测技术要点 2.1 试剂配制与保存 2.1.1缓冲液：取缓冲剂一包入烧杯，量筒量取1000 ml蒸馏水充分溶解，倒进大口塑料瓶，室温保存。 2.1.2显色剂：用移液枪加入10.5 ml缓冲液，加盖摇匀；0～4℃保存。 2.1.3酶液：用移液枪加入3.1 ml缓冲液，加盖摇匀；0～4℃保存，4d内用完。 2.1.4 底物：加入3.1 ml蒸馏水，加盖摇匀；0～4℃保存，14d内用完。 酶粉和底物的粉剂在冷冻条件下保存，临用前配制。1瓶粉剂配制后可分成小瓶，暂时不用的储存在冷冻室中，待用和用后的试剂在0～4℃保存。酶液反复解冻会影响其活性，最多不超过2次。 2.2 样液制备 取有代表性的干净蔬菜，去掉表面泥土和烂叶，剪成1 cm碎片，用天平准确称取2.00g，放入50mL提取瓶中，加10ml缓冲液振荡2～3 min，取出提取液，静置3min，待用。样品与缓冲液比例为1:5。 2.3 仪器操作与样品测定 2.3.1仪器预热：接通电源，仪器自检，检查样品池是否漏光及各测量通道光路的光强是否足够，自检结束后待机预热10 min，仪器工作稳定后进行测量。 2.3.2对照测定：用专用移液枪吸取缓冲液2.5ml于比色皿，依次加入0.1ml酶液和0.1ml显色剂摇匀后于37℃静置15min（每批样品的控制时间应一致），加0.1ml底物摇匀后立即放入仪器比色池内，按对照检测键，记录反应3 min的吸光度变化值。空白对照值的吸光度变化值在0.4～0.8，才可测定样品，否则要重新做空白测定。 2.3.3样品测定：用专用移液枪吸取样品提取液2.5ml于比色皿，其它操作步骤与对照测定相同，最后按样品检测键，记录测量样品的抑制率结果和吸光度变化值。 2.3.4结果判定：测定结果以抑制率表示。根据GB／T5009．199—2003判定标准，当样品提取液对酶的抑制率≥50％时，表示蔬菜中有高剂量有机磷或氨基甲酸酯类农药存在，样品为阳性结果。阳性结果的样品需复检2次或者用气相色谱法进一步确定具体的农药品种和含量。 3 注意事项 3.1仪器在使用过程中，更换了酶试剂或重新设置了测量时间，必须进行“对照测量”。缓冲液的配置一定要用蒸馏水、纯净水或去离子水，不可使用矿物质水，否则在检测过程中干扰较大，影响准确性。 3.2检测室室内温度的影响。检测室温度在20～30℃之间,使用改进后的酶,可以直接在室温下培养,22℃左右培养20 min,25℃以上培养15 min;如果室温低于20℃,必须放进37～38℃培养箱中培养[2]。 3.3 酶活性对检测结果的影响。酶是有生物活性的特殊蛋白，是检测技术成功的关键，要避免试剂污染引起酶活性的变化。在贮藏过程中要保证其贮藏温度,尤其是酶试剂及底物要在0～4℃温度条件下保存,试剂从冰箱取出，先恢复至室温，摇匀后再使用。试剂使用时，必须遵循“只出不进”原则：即酶、显色剂、底物一旦从试剂瓶中被移取，即使暂时不需要了，也不得返回原试剂瓶中，以免污染原试剂。3.4 待测样品放入比色池速度的影响。待测样品加入底物后,应马上摇匀放入比色池,否则影响数据的准确性。经日常实践,在小白菜样品检测中,立刻放入的抑制率为23.6%，1min后放入的抑制率为54.7%,可见,加试剂后放入测试仪的速度快慢可影响其结果准确性。 3.5 抑制率≥50％的样品，至少要重复检测2次，才能确定此样品是否合格。葱、蒜、萝卜、韭菜、芹菜、香菜、蘑菇及番茄汁液中