不同温湿指数对藏獒外周血淋巴细胞凋亡及HSP70蛋白表达的影响_狄和双.pdfVIP

江苏农业科学　20 11 年第39 卷第5 期 — 27 1 — 狄和双, 王利刚, 郑筱峰, 等. 不同温湿指数对藏獒外周血淋巴细胞凋亡及HSP70 蛋白 达的影响[J ]. 江苏农业科学,20 11, 39 (5 ):27 1 -273 . 不同温湿指数对藏獒外周血淋巴细胞凋亡 及HSP70 蛋白 达的影响 狄和双, 王利刚, 郑筱峰, 蒋珊珊, 王丽华, 贺生中 (江苏畜牧兽医职业技术学院, 江苏泰州225300 ) 　　摘要:选择体重、年龄相近的藏獒10 只, 研究不同温湿指数(THI )对藏獒的生理常数、外周血淋巴细胞凋亡及 HSP70 蛋白 达的影响。研究结果 明:(1 )夏季高温季节, 随THI 升高, 藏獒的直肠温度和呼吸频率也逐渐升高, 极 显著高于春季非热应激组;(2 )夏季高温热应激显著增加了藏獒外周血淋巴细胞的凋亡率, 淋巴细胞早期凋亡率在 THI 为83 . 5 8 时达到最高, 与非热应激组相比差异极显著;(3 )夏季高温热应激诱导外周血淋巴细胞HSP70 蛋白的 达, 与非热应激组相比差异极显著。结论:(1 )夏季高温热应激显著提高了藏獒的直肠温度和呼吸频率;(2 )热应激诱 导藏獒外周血淋巴细胞发生凋亡;(3 )热应激诱导藏獒外周血淋巴细胞HSP70 蛋白过 达。 　　关键词:藏獒;温湿指数;细胞凋亡 　　中图分类号:S829 . 21 　　文献标志码:A 　　文章编号:1002 - 1302 (2011 )05 - 0271 - 0 3 　　我国南方属高温高湿地区, 尤其是夏季, 高温高湿的环境 时间均为10 :00 。 往往造成犬发生一系列的不良反应, 甚至发生病理性生理变 1. 2 　藏獒直肠温度的测定 [1 ] 化, 严重时导致死亡, 称为热应激 。由于犬的汗腺不发达, 采集藏獒血样前,分别测定藏獒的直肠温度。将兽用体 高温引起的热应激对犬影响较大。藏獒原产中国西藏,属于 温计感应部分插入直肠,5 min 后取出读数。 耐寒不耐热的犬种,30 ℃的气温就会脱毛。随着养犬业的发 1. 3 　藏獒呼吸频率的测定 展, 南方地区也引进了大量的藏獒,关于南方高温高湿环境对 采集血样前,用秒 和计数器分别测定每分钟供试藏獒 藏獒的生理常数及细胞凋亡的影响机制, 国内外尚未见报道。 腹部和胸廓的起伏次数,作为藏獒的呼吸频率。 本研究通过检测不同温湿指数 (THI )条件下藏獒生理常数、 1. 4 　外周血淋巴细胞凋亡分析 外周血淋巴细胞凋亡及HSP70 蛋白 达的变化, 探讨热应激 4 次采样期间, 对藏獒进行前肢内侧头静脉采血10 mL, 对藏獒的不良影响。旨在为阐明藏獒热应激的机理提供参 用肝素钠抗凝处理,用Ficoll 试剂分离藏獒外周血淋巴细胞, 考, 也为南方培育耐热的藏獒品系提供理论依据。 采用Annexin V/PI 双染法检测细胞凋亡率, 用冰冷(4 ℃)的 6 PBS 洗涤淋巴细胞2 次, 调整细胞数为(1 ～5 )×10 个/ mL。 1 　材料与方法 操作过程按照试剂盒 (BD Pharmingen, CAT :556547 )说明书 1. 1　试验动物 进行, 上流式细