两种简易高效的单克隆抗体提纯方法.pdfVIP

单钳 夺 铱 ； 椒、一铂毅缕 维普资讯 。 单 克 隆 抗 体 通 讯 第 11卷 第 2期 1995年 6月 - 52 · 由表 1可知，6BI1克隆数在克隆化前48 2．2 饲养 细胞数量对克隆形成数的影响 h 24h与克隆化当时及克隆化后 24h加入 表 2中饲养细胞加入时间为克隆化前 24h。 饲养细胞相 比，有显著差异 (P0-叭)。 表 2 不同数量饲养细胞 6B11克隆形成敷的影响 (克隆形成敷 ／96孔) 由表 2可知，随着饲养细胞浓度增加 ， 加入饲养细胞 ，可以给杂交瘤细胞生长提供 6BI1克隆形成数也随之增多 。 一 个 良好的环境。饲养细胞数量与克隆形成 饲养细胞能分 。生长因子 ，刺激杂交 也有一定关系，随着加入饲养细胞数量增加， 瘤细胞生长．并且能清除营养液中的死细胞 杂交瘤克隆形成数也随之增多，如饲养细胞 成份 ，因而可明显提高克隆形成率。常用的 为每孔 1×10。时，克隆形成数只有 17．7 ． 有小鼠脾细胞、胸腺细胞及腹腔巨嘘细胞等 。 但当加入饲养细胞增加至每孔 6×10‘时 ，克 本实验结果表 明，克隆化前 24～48h加入饲 隆细胞生长状态欠佳 ，较早出现克隆萎缩，可 养细胞 ，杂交瘤克隆形成早、数量多，在克 能与营养支持不足有关。 隆化后 2d，即有 23 ～25 的小克隆形成 。 根据本文研究，结合同类研究报道．我 而在克隆化后 24h及克隆化当天加入饲养 们认为每孔加入 2×10个饲养细胞较为适 细胞 ，6BIl的克隆形成数明显减少。表 明预 宜 。 l_2～ 年 两种简易高效的单克隆抗体提纯方法 刘秀梵 宽 ；弓 (栖州大学农学院畜禽传染病实验室 ．扬州 22500~) A摘要本文介绍两种纯化单克隆抗体的方法．即用聚乙二醇(PEG．Mr=6o00)沉 淀法提纯 IgM 和辛酸一硫醯铵沉淀法纯化 IgG。用这两种方法成功地从小 鼠腹水 型 单克隆抗体 中得到 了较纯净 的、活性损失较少的抗体制剂。经多次使用 ，证实它们 - 现在山东莱阳农学院动物医学系工作 维普资讯 · 53 · 是两种简易、高效的单克隆抗休提纯方法 ，适于推广应用。 关键词 单克隆抗体；提纯{聚乙二醉；辛酸一硫酸铵 单克隆抗体的提纯方法很多，但有 的需 加入样品中，边加边搅拌，加完后继续搅拌 较 昂贵的设备，成本高 I有的操作复杂，费 30mln，10000g离心 30rain，去沉淀 (白蛋 时费力；有的提纯效果不理想，抗体括性受 白和其它非IgG蛋 白)取上清与 l0xPBS混 损失等。我们通过对多种方法应用的综合 比 合 (每 10体积的上清加 1体积 的 lO×PBS： 较It]，模索出两种简易高效的单克隆抗体提 1000m l，10×PBS：80gNaO 、2gKC1、11．5 纯方法：聚乙二醇 (PEG)沉淀 IgM单克隆抗 gNa2HPO．、2gKH2P0·、20m1100mmol／L 体和辛酸一硫酸铰沉淀 IgG单克隆抗体，现介 EDTA，pH7．4)，用 5otol／L或 lotol／L 绍如下 ： NaOH调pH至 7．4。上清冷至4℃，加硫酸铵 (0．277s／mr，使最终饱