环境微生物学实验指导书.docVIP

实验一 显微镜的原理及其使用方法 一．目的 1、学习普通光学显微镜的基本原理 2、学习掌握光学显微镜的使用方法 3、结合实验室提供的实验装片观察微生物的形态，并学习测量微生物大小的方法 二、实验器材 1、微生物实验装片 2、显微镜、目镜测微尺、物镜测微尺（镜台测微尺）、载玻片，盖玻片等 三、实验步骤 （一）显微镜的结构和各部分的作用 其构造包括机械和光学两部分。 机械部分主要包括： 镜筒 镜筒长度一般是160mm。它的上端装有接目镜，下端有回转板。回转板上一般装有三个接物镜。 载物台 载物台是放置标本的平台，中央有一圆孔，使下面的光线可以通过。两旁有弹簧夹，用以固定标本或载玻片。有的载物台上装有自动推物器。 调节器 镜筒内旁有两个螺旋，大的叫粗调节器，小的叫细调节器，用以升降镜筒，调节接物镜与所需观察物体之间的距离。 光学部分主要包括 接目镜 一般使用的显微镜具有2~3个接目镜，其上常刻有“5×”或“10×”或“15×”等数字及符号，表示使用时可以放大5倍，10倍，15倍。观察微生物时常用10倍或15倍的接目镜。 接物镜 接物镜装在回转板上，可分低倍镜，高倍镜和油镜3种，其相应的放大倍数常是10、40（或45）100（或90）。通常显微镜的放大倍数等于接物镜与接目镜放大倍数的乘积。例如，用放大40倍的接物镜与放大10倍的接目镜所得的物象的放大倍数为400，如果用放大15倍的接目镜则放大倍数为40×15=600。接目镜装在镜筒上端，在使用过程中并不经常变动，所以通常所谓的低倍镜、高倍镜或油镜的观察主要是指使用不同的接物镜而言的。 油镜的放大倍数最大（90或100）。放大倍数这样大的镜头，焦距就很短，直径就很小，所以自标本玻片透过的光线，因介质密度（从玻片至空气，再进入油镜）不同，有些光线因折射或全反射，就不能进入镜头，致使进入个别光线过少，物象显现不清楚，所以为了不使通过的光线有所损失，须在油镜与玻片中间加入和玻璃折射率相仿的镜油。因为这种接物镜使用是要加镜油，所以我们叫它油镜。一般的低倍镜或高倍镜使用时不加油所以我们叫它干镜。 使用低倍镜和高倍镜时，一般做活体的观察，不进行染色。在观察细小动物时，低倍镜主要用来区别动物的种类和看出它们的活动状态，而高倍镜则可以看出动物的结构特征，低倍镜容易看到物体的全貌，油镜在大多数情况下使用来观察染色的涂片。 3、集光器 集光器在载物台的下面用来集合由反光镜反射来的光线。它可以上下调整，中央装有光圈，用以调节光线的强弱。当光线过强时，应缩小光圈或把集光器向下移动。 4、反光镜 装在显微镜的最下方，有平凹两面，可自由转动方向，以反射光线至集光器。 （二）显微镜使用和保护的方法 1、低倍镜的使用法 （1）置显微镜于固定的桌几上，窗外不宜有阻碍视线之物。 （2）拨动回转板，把低倍镜移到镜筒的正下方，和镜筒连接而对直。 （3）拨动反光镜向着光线的来源处，用眼对准接目镜仔细观察，若视野完全为白色，这是光线已经通到镜里的表示。 （4）把载玻片放到载物台上，要观察的标本放到圆孔的最中央。 （5）将粗调节器向下旋转，同时眼睛注视接物镜，以防接物镜和载玻片相碰，当接物镜的尖端距载玻片0.5mm时要停止。 （6）把粗调节器向上旋转，左眼向目镜里观察。如标本显出，但不十分清楚，可用细调节器调节，到完全清楚。 （7）假如因旋转粗调节器太快，致使超过焦点，标本不能出现，不应在眼睛注视接目镜的同时向下旋转粗调节器，必须从第（5）条做起，以方因为没有把握的旋转，使接物镜与载玻片接触。 （8）在观察时，最好两眼都能同时睁开。如用左眼看显微镜，右眼看桌上纸张，可以一面看一面画出看到的图象。 2．高倍镜的使用方法 （1）使用高倍镜以前，先用低倍镜检查，把要观察的标本放到视野正中。 （2）拨动回转板使高倍和低倍两镜头互相对换，当高倍镜移动到载玻片时，往往镜头十分靠近载玻片。这时必须注意是否因为高倍镜靠近的缘故使载玻片也随着移动。如果载玻片有移动的现象，则应立即停止推动转向板，把高倍镜退回原处，再按照使用低倍镜的方法，矫正标本的位置，然后旋转调节器，使镜筒稍微向上，再对换高倍镜。 （3）当高倍镜已被推到镜筒下面时，向镜内观察所显现的标本，往往不是分清楚，这时可旋转细调节器，上下移动，但不要过分移动。 3、油镜的使用方法 （1）如用高倍镜放大，倍数还不够，则须油镜，用它之前先用高倍镜检查，把要观察的物体放到视野之中。 （2）用油镜时，在载玻片上加一滴镜油，然后拨动回转板对换高倍镜和油镜，使油镜和油接触，后用接目镜观察，假如不清晰，可旋转调节器，但不要粗调节器。 （3）用过油镜后，必须用擦镜纸或软绸将载玻片和油镜所粘着的油拭净，必要时用少许二甲苯擦拭。 4、显微镜的保护方法 显微镜应放在干燥的地方，使用时须避免强烈的日光照射