低温胁迫下草鱼ZC7901细胞系内丙二醛含量的变化.pdfVIP

维普资讯 第 29卷 第4期 曲 阜 师 范 大 学 学 报 V01．29 No．4 2003年 l0月 Journal of Qufu Normal University Oct．2003 低温胁迫下草鱼 ZC一7901细胞系内 丙二醛含量的变化 徐德立①②， 赵 小立②， 张 铭② (第一作者：男，28岁。硕士。助教；①曲阜师范大学生命科学学院，273165。山东省曲阜市； ②浙江大学生命科学学院 ，310012，浙江省杭州市) 摘要 ：在不同低温胁迫时间下。对草鱼(Ctenopharyngodonidellus)吻端细胞系zc一7901细胞内丙二醛含量 的变化进行了研究。并探讨了其耐寒机理 ．结果表明，与对照 (28℃)相比，2～3℃低温胁迫6h、12h、24h、48 h、72h时，草鱼ZC一7901细胞内丙二醛(MDA)含量在低温 12h前逐渐增加 ，之后其含量逐渐下降，但仍高于 对照组．结果提示 ，在低温胁迫下草鱼ZC一7901细胞内MDA的含量仍能保持较低的水平，这可能是其耐寒的 重要原 因． 关键词 ：草鱼细胞系ZC一7901；低温胁迫；丙二醛 中图分类号：Q256 文献标识码 ：A 文章编号 ：1001．5337(2003)04-0088．03 细胞培养 (cellculture)是生物技术 中最重要的 EDTA消化 5 10min，弃消化液加入培养液(含 10％ 技术之一，越来越多的学者利用培养的细胞作为模 新生牛血清的 199培养液)，用吸管轻轻吹打，使贴 型研究抗病抗逆的机理 ．1981年 ，张念慈和杨广智 壁细胞脱落分散，制成细胞悬液，1：2传代，28℃恒 建立 了我 国第一个鱼类细胞系 一草鱼吻端 ZC一 温静止培养 ． 7901细胞系 j．由于在鱼的整体水平上研究其耐寒 1．3 培养细胞的处理 机理很复杂，受到许多因素的影响，而利用培养的细 草鱼 ZC一7901细胞长满细胞瓶后 ，于 2—3oC 胞研究耐寒机制，条件较为均一，受其它因素影响较 分别低温胁迫处理 6h、12h、24h、48h、72h，对照为 小，因此我们采用草鱼吻端 ZC一7901细胞系作为模 正常 28℃生长的细胞 ． 型，在细胞水平上研究其耐寒机理．本研究不仅对培 1．4 膜脂过氧化作用的测定 养的鱼细胞耐低温机理的研究有重要的理论意义， 参照 Heath和 Packer等 (1968)t21、林 植芳 等 而且对于筛选耐低温的鱼细胞系具有重要的现实意 (1984)b的方法测定过氧化产物丙二醛 (MDA)的形 义 ． 成 ．该方法基于以下原理：1摩尔丙二醛可与 2摩尔 硫代巴比妥酸 (1BA)形成红棕色 的三 甲川 (trime． 1 材料与方法 htine)，三甲川在 532nlTI以及 600nlTI处有特征吸收 峰，通过计算三 甲川生成的量可以推算出MDA的 1．1 实验材料 量 ．取低温胁迫处理过的细胞 ，用 0．05mol／L的磷酸 草鱼吻端细胞系ZC一7901由浙江省淡水水产 缓冲液(pH7．8)制成细胞悬液，用玻璃匀浆器匀浆， 研究所提供 ． 然后于4000rpm离心 10min，取上清液 ．将 1．5