凋亡抑制基因Survivin在甲状腺癌组织中的表达及意义.docVIP

凋亡抑制基因Survivin在甲状腺癌组织中的表达及意义 　　作者：刘钢　史火喜　袁又能　黄文广 作者单位：435000　湖北省，武汉大学医学院黄石市中心医院普外科(刘钢、史火喜、袁又能);华中科技大学同济医学院附属协和医院胃肠外科中心(黄文广) 　　【摘要】 目的　探讨凋亡抑制基因Survivin在甲状腺癌中的表达及其与病理预后之间的关系。方法　应用免疫组化SP法检测68例甲状腺癌、54例甲状腺腺瘤、32例癌旁组织和23例正常甲状腺组织中Survivin的表达情况，评价Survivin的阳性表达率与甲状腺癌的病理预后之间的关系。结果　Survivin在甲状腺腺癌组织、甲状腺腺瘤组织、癌旁甲状腺组织及正常甲状腺组织中的阳性表达率分别为44.1%、25.9%、18.8%和0。甲状腺未分化癌和髓样癌组织中Survivin的阳性率明显增高，存在转移和临床Ⅲ、Ⅳ期病例中，Survivin的阳性率明显增高。结论　Survivin过量表达可能与甲状腺肿瘤的发生发展有关，癌组织中Survivin的表达可作为判断甲状腺癌病理类型和预后的参考指标。 　　【关键词】 甲状腺肿瘤;　凋亡抑制蛋白类;　基因表达;　免疫组织化学 　　细胞凋亡是在多基因调控下主动的自杀过程，又称为细胞的程序性死亡。肿瘤细胞凋亡的减少助长了肿瘤的恶性生长，放化疗的抗肿瘤机制体现在诱导肿瘤细胞的凋亡上，在凋亡通路上抗凋亡基因与促凋亡因素相互制约，对凋亡抑制基因的深入研究必将有利于解除肿瘤细胞凋亡的抑制，在肿瘤的治疗上具有重要意义。Survivin是1997年由美国的Ambrosini发现的一种凋亡抑制基因，在凋亡通路上扮演着负调节角色，它不仅与肿瘤的发生发展有关，而且与肿瘤的预后及复发有关。国内外文献对消化道肿瘤、泌尿系肿瘤及淋巴造血系肿瘤研究较多，但在甲状腺癌方面的研究较少，本研究采用免疫组化SP法，探讨Survivin在甲状腺癌组织、甲状腺腺瘤组织、癌旁甲状腺组织及正常甲状腺组织中的表达情况，探讨Survivin在甲状腺癌组织发生发展过程中的作用，以揭示Survivin与甲状腺癌的生物学行为及预后的关系。 　　一、材料和方法 　　1. 标本取材：取自华中科技大学附属协和医院2006年8月至2010年8月手术治疗的甲状腺病例标本，所有标本均经10%甲醛固定、石蜡包埋，连续切取5 Μm切片，60 ℃烤片2 h,37 ℃过夜备用，标本收集情况见表1。其中68例甲状腺癌按WHO分期有乳头状癌43例，髓样癌20例，未分化癌5例，未见滤泡状癌;AJCC分期Ⅰ期26例，Ⅱ期22例，Ⅲ期15例，Ⅳ期5例;淋巴结转移30例，未见淋巴结转移38例。　表1　甲状腺疾病标本收集情况 　　2. 免疫组化试剂：Survivin为鼠抗人单抗(产品编号为ZM-0098)，为美国Zymed公司产品，SP-9000通用试剂盒为美国Zymed公司产品，购自武汉博士德生物技术公司。 　　3. 染色方法：切片脱蜡水化以后，用3% H2O2室温处理15 min，微波修复抗原，正常山羊血清室温孵育30 min，滴加一抗，4 ℃冰箱孵育过夜。滴加生物素标记的二抗，室温孵　　育30 min，DAB显色。经苏木精复染后，脱水、透明并封片，各步之间均经充分洗涤，用已知Survivin阳性的扁桃体作阳性对照，以PBS代替一抗作阴性空白对照。 　　4. 判断标准：以细胞膜和细胞质内出现黄色至深棕色颗粒为阳性细胞。由两位病理医师采用双盲法阅片，结果不一致时不采用。阳性细胞达到总数的25%时确定为阳性，25%时确定为阴性。 　　5. 统计学分析：所有数据采用SPSS 10.0统计软件包进行统计分析，进行Χ2检验，以P0.05为差异有统计学意义，另采用BioMedCalc软件进行核实，其结果与SPSS软件计算结果一致。 　　二、结果 　　1. Survivin在不同甲状腺组织中的表达情况(图1，表2)：光镜下Survivin阳性反应表现为细胞核或细胞质部分染成棕褐色。在甲状腺癌及甲状腺腺瘤组织，阳性部分局限于肿瘤上皮部分，在癌旁甲状腺组织，阳性部分局限于滤泡上皮，正常甲状腺组织染色阴性。Survivin阳性率在甲状腺癌及癌旁甲状腺组织(18.8%)(P0.05)。表2　Survivin在不同甲状腺组织中的表达情况 　　2. 甲状腺癌中Survivin表达与甲状腺癌临床病理指标的关系(表3)：Survivin的表达程度与甲状腺癌组织学类型、淋巴结转移情况和临床病理分期有显著关系。在恶性程度较高的未分化癌和髓样癌中，Survivin阳性率明显高于恶性程度较低的乳头状癌，在有淋巴结转移病例或临床Ⅲ、Ⅳ期病例，Survivin阳性率高于相应的无