分离人癌基因的三种转染选择S统的比较.pdfVIP

琪[免HEREDFTAS(Beijing)．8(5):下2529里985 一“ ～ ． ．－ 一 ． ‘ －一 一 二 奋 “． ‘一二 ，，． 一‘．‘‘ ．、＿ ，… ， 、＿， 声子 1i， 、/引场艺L : 目J ，－ ‘二‘ 1、 声．，f‘‘云， ． ，二 ，，．H ， 护． 护， 卢 欣 王秀琴 吴 吴 （中国医学科学院肿瘤研究所细胞生物室，北京） 在分离人癌基因过程中，最关键的步骤是 中率，减少工作量。 如何将外源人癌 DNA引人受体细胞，并得到 止l.f 二口二二、二二.4L-.4-4-It.LfL.rrrdl-i‘6I}tl去藻 材 料 与 方 法 由外源人癌 DNA诱发的转化灶细胞，继而纯 1--‘1 一！‘‘J lJ 1. 化有转化活性的人癌 DNA片段。 一（）实验材料 现在采用最多的受体细胞为 Todar。建立 1．细胞 小鼠胚胎成纤维细胞系 NIH/ 的小鼠胚胎成纤维细胞系 NIH/3T3[11，它在 3T3，由美国G.M.Cooper教授赠送。用美 摄取及表达外源 DNA 方面具有特殊的优越 国GIBCO产 MEM 培养液加10多小牛血清 性14［)，并且具有接触抑制生长的特性 ，〔‘。迄今为 天（津杏林食品厂生产）培养，每隔3天传代1 止，大多数有活性的细胞转化基因 癌（基因）都 次，每次1:2密度传代。 是通过诱发单层培养的NIH邝T3细胞发生形 2.DNA 态上转化的集落而被检测出来的[41［。然而，用 （1)质粒DNA:含 pSVZ-gpt质粒的菌 这种方法来筛选肿瘤 DNA 中的转化基因存 种，由中国预防医学中心病毒研究所胡玉文同 在着很大的局限性51〔。首先是不同的转化基因 志赠送。p5VZ-nc。质粒 DNA，由英国H. 所诱发的 NIH/3T3细胞转化的形态有所不 Land博士赠送，作者将其转人E.coliHB101 同51‘，另外，NIH/3T3细胞本身较易发生自发 受体菌中。 转化，形成自发转化灶1121。自发转化灶与诱发转 上述两种质粒DNA均按文献 8［]所提供 化灶在形态上很难区别，给准确挑选诱发转化 的煮沸法从 E.coli．中提取而得。 灶细胞的工作带来困难。 为了克服上述不足， (2)人癌 DNA;7例食管癌组织 DNA; 人们在从转染细胞中挑选转化灶时采用了一些 1例胃癌组织 DNA;1例卵巢癌组织DNA;1 选择系统，如霉酚酸选择系统和 G418选择系 例横纹肌肉瘤DNA；人食管癌细胞系Eca109 统。二者的关键之处均在于使用某种抗性标记 DNA；人食管癌淋巴瘤转移细胞株 CaEs17 基因分（别为Ecogpi基因和 、。基因）与肿瘤 DNA；人鼻咽癌上皮样和梭形细胞株 CNE-1 DNA一起转染受体细胞，使受体细胞带上抗性 DNA；人鼻咽癌上皮细胞株CNE-2DNA。上 标记基因如（Ecogpi基因或ne。基因），从而 述DNA均按常规方法从手术癌组织标本或从 对特定的药物表现出抗性 二（者相应对霉酚酸 培养到约10$细胞数的细胞中提取而得。 和 G418表现抗性），形成抗性集落。现有资 二（）实验方法111［.131 料表明，细胞在摄人外源DNA时，绝大多数 1．用人癌 DNA转染细胞，在5务小牛血 都是同时摄人多个外源DNA片段。因此，抗 — 性集落的70-80%都同时含有抗性标记基因 LtsXineEal.:ComparisonofThreeTransiection. 和肿瘤DNA片段[3]［。因此，从抗性集落中找 。、sel竺沙飞生士扮少几少lating督罗anOncogenes ”’“’～‘ ”’－－－ 一 ‘“” ‘’／‘“’一 1‘-.H ’“” 1)中国科学院自然科学基金资助项目。 出由肿瘤DNA诱发的转化灶，可大大提高命 本文于1986年1月30}i收到。 ．26 ·