梨自交不亲与性反应过程中花粉(管)内微丝骨架结构的变化.pdfVIP

梨自交不亲和性反应过程中花粉(管)内 微丝骨架结构的变化。 张绍铃刘珠琴徐国华 吴俊 吴华清 (南京农业大学园艺学院，南京210095) 摘要：用荧光显微镜和激光共聚焦显微镜观察了离体条件下梨花柱§RNase处 理后花粉(管)内微丝骨架结构的变化。结果表明，梨花粉管生长速率在用自体的 几乎没有影响。对照及亲和花粉粒在萌发之前其微丝骨架呈环状等形式排列，萌发 后花粉粒内微丝成束成扇形向萌发孔处延伸，并与花粉管内轴向排列的束状微丝纤 维相连接，花粉管尖端5～15／-m处未观察到微丝骨架；而自交不亲和花粉(管) 内的微丝骨架结构随加入自花花柱S-RNase后继续培养的时间的不同而呈现不同 的形态：在处理Omin时，萌发的花粉及生长的花粉管中微丝结构与对照花粉 (管)内的微丝结构相似，呈环状等形式排列；但继续培养20min后，花粉(管) 内微丝结构开始变化，微丝骨架从纤维状逐渐转变为网络结构，并从花粉管的胫端 移向花粉管的顶端，最终转变为点状结构分布于整个花粉管。虽然花粉内微丝最终 也解聚为点状结构，但其变化要比花粉管内微丝结构慢得多。研究结果表明肌动蛋 白细胞骨架参与了梨自交不亲和性反应的调控过程。 关键词：梨；S-Rnase自交不亲和性；肌动蛋白；花粉管 制[1]。雌蕊识别自我及非我花粉的过程实际上是来自雌蕊的信号分子与来自花粉的信号分子 之间的识别及信号传递过程。这些信号分子主要是s位点连锁基因编码的糖蛋白。梨是典 型的配子体型自交不亲和果树，目前有关梨自交不亲和性机理的研究主要集中在有关雌蕊自 (SFB)的鉴定L5~71等分子机理研究领域。 微丝骨架是细胞骨架的一种，它主要由肌动蛋白组装的螺旋状多聚体和肌动蛋白结合蛋 白组成。已有的研究证明微丝骨架不仅是花粉管的重要组成成分，与肌球蛋白一起介导了胞 质流动，从而将花粉管生长所需的分泌小泡运送到花粉管的顶端，为花粉管顶端生长提供成 膜、成壁物质，而且可能作为重要的信号分子或信号转换器参与花粉萌发和花粉管极性生长 的调控Ls～loJ。近年来，已有研究表明微丝骨架在芸差属和罂粟科植物自交不亲和反应过程 中起作用…~13I，但对以S-RNase为基础的配子体植物自交不亲和反应过程中肌动蛋白微丝 骨架动态变化的研究尚未见报道。 nnzsl@sina．com．cll *基金项目：高校博士学科点专项科研基金项目；作者：E-mail 梨自交不亲和性反应过程中花粉(管)内微丝骨架结构的变化335 因此，本文在梨自交不亲和性机理已有的研究基础上，开展微丝骨架结构的重组是否参与 调节梨自交不亲和性反应过程的研究，这将有助于进一步完善梨自交不亲和性机理的理论。 1材料与方法 1．1花粉收集 以砂梨(Pyruspyrifolia 为试材，材料采自南京农业大学江浦农场。采集开花前1～2d的花蕾，切取花柱，称重后贮 存于液态氮中备用，同时收集‘今村秋’花药，用硫酸纸包好放入密闭的硅胶瓶中，常温下 干燥后一20℃保存。 1．2花柱S-RNase分离纯化、定量及纯度和活性的检测 6|。 1．3离体条件下花粉萌发和花粉管生长 采用液体培养基培养花粉参照张绍铃等的方法H]。液体培养基中分别加入‘今村秋’花 5 的终浓度均为0．1U。以基本培养基为对照，于25℃黑暗条件下分别培养6h后统计300粒 花粉萌发率和50根花粉管长度，每个处理重复3次。 为了观察花粉粒及花粉管内微丝结构的变化，我们先用基本培养基培养不同时间后，再 与花粉萌发率测定试验相同。培养后取样进行微丝结构的荧光染色和观察。同样以基本培养 基为对照。 1．4花粉(管)内微丝结构的荧光标记及观察 法[17]染色进行染色。而后用Zeiss荧光显 D，m RA MRC 微镜和配备Zeiss镜头的Bio 1024 ES激光扫描共聚焦显微镜观察标记一 后的花粉(管)内微丝结构。采