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江苏农业科学 2011年第 1期 一 65一 张月婷，桂大萍，叶小文，等．TDZ在花生离体扩繁中的应用研究[J]．江苏农业科学，2011(1)：65—68 TDZ在花生离体扩繁中的应用研究 张月婷，桂大萍，叶小文，雷 永，廖伯寿 (中国农业科学院油料作物研究所 ／农业部油料作物生物学重点开放实验室，湖北武汉 430062) 摘要：利用 TDZ(thidiazuron)处理不同基因型花生，研究其在花生丛生芽诱导与扩繁中的作用。结果表明，中花 8 号在种子萌发阶段用6mg／LTDZ、诱导和扩繁阶段用4mg／LTDZ，丛生芽扩繁效率最高。而保21在种子萌发阶段用 2mg／LTDZ、诱导和扩繁阶段用4mg／LTDZ，丛生芽扩繁效率最高。不同基因型差异明显，四粒红的丛生芽扩繁效率 最高，而中花8号明显低于其他品种。另将四粒红丛生芽块进行了农杆菌侵染转化，GUS的阳性率为 15．87％。 关键词 ：花生 ；子叶节 ；丛生芽；扩繁 中图分类号：$565．201 文献标志码 ：A 文章编号：1002—1302(2011)叭 一0065—03 我国是世界上最大的花生生产、消费与出口国。作为最 1．3 培养基 重要的油料作物与经济作物之一，花生(ArachishypogaeaL．) 萌发培养基：MB(MS无机盐 +维生素 B 有机成分)+ 在保障食用油供给、农民增产增收等方面发挥了重要的作用。 TDz(0、0．5、2、4、6、8mg／L)，丛生芽诱导和扩繁培养基： 因此，选育高产优质品种是花生产业发展的基础。可利用基 MB+TDZ(0、2、4、8m#L)，伸 长 培养 基：MB+6一BA 因资源的匮乏、优 良抗性基 因源与不 良性状紧密连锁 以及种 3mg／L，生根培养基：MB+NAA1m#L。以上培养基中加入 问杂交不亲和性等因素极大地限制了花生传统育种的发展， 蔗糖3Og／L，琼脂 8 L，pH值调整到 5．8—6．0，在 121℃、 因此基因工程育种越来越受到重视。 105kPa条件下灭菌 20min。 花生基因工程育种的关键是建立高效的再生体系，为转 1．4 试验 方法 基因提供充足的受体材料。由于花生组织培养再生率低，且 1．4．1 TDZ浓度对丛生芽诱导和扩繁的影响 选取中花 8 易受基 因型的影响，相关研究进展缓慢。TDZ(Thidiazuron) 号和保 21成熟饱满种子 ，于超净工作 台上用 75％乙醇浸泡 是一种具有细胞分裂素活性的新型植物生长调节剂，已成功 1min，再用0．1％HgC1浸泡 10min，无菌水冲洗 5～6次。 地应用于多种植物的愈伤组织、体细胞胚及不定芽诱导、快繁 无菌条件下剥去种皮，将种子胚端朝下接种于不同的萌发培 和植株再生 。在花生的组织培养研究 中，TDZ已在愈伤 养基 中，每浓度 lO～15瓶，4～5粒 ／瓶，(26±2)℃、光照 组织诱导 、体细胞胚诱导 和从花生子叶、胚轴、叶片、叶 16h／d条件下培养。3周后去除子叶、主芽和侧芽，切取子叶 柄等多种外植体诱导丛生芽 等方面获得成功，但 以子叶 节在不同诱导培养基上进行丛生芽诱导。培养4周后统计产 节为外植体诱导丛生芽 尚未见报道。国内研究多使用 生丛生芽的外植体数，与总外植体数相比，计算丛生芽诱导 2，4一D、Z，r和 6一BA等激素来诱导花生不定芽和体细胞 率。将产生的丛生芽块切成小块，转接于不同扩繁培养基进 胚 。本研究以不同花生品种为材料，用TDZ诱导子叶节 行扩繁，每 3周转接 1次 ，转接2轮后统计新形成丛生芽组织 产生丛生芽并进行扩繁，同时对农杆菌转化丛生芽进行 了初 的外植体数，与转接的总外植体数相 比，计算丛生芽扩繁 步研究，旨在探索TDZ在花生离体培养中对丛生芽扩繁的作 效率 。 用，为进一步开展花生转基因研究奠定基础。 1．4．2 丛生芽再生 转接