烟草4CL蛋白免疫荧光定位研究.pdfVIP

西北植物学报 ,2007 ,27 (6) :1073 - 1077 Act a B ot . B or eal . Occi dent . Sin . 　　文章编号 (2007) 烟草 4CL 蛋白免疫荧光定位研究 1 ,2 1 1 范丙友 ,陆　海 ,蒋湘宁 ( 1 北京林业大学 生物科学与技术学院 ,北京 100083 ;2 河南科技大学 农学院 ,河南洛阳 47 1003) ( ) 摘 　要 :4香豆酸辅酶 A 连接酶 4CL 是维管植物木质素生物合成途径的关键酶 ,应用原核表达系统获得了毛白杨 可溶性 4CL 1 融合蛋白, 以Ni2 + A gro se 亲和柱层析纯化得到的 SD SPA GE 电泳纯的毛 白杨 4CL 1 融合蛋白为抗 原 ,免疫家兔获得毛白杨 4CL 1 多克隆抗体 ,West ern blotting 鉴定表明兔抗毛白杨 4CL 1 多克隆抗体具有高度特异 性 ,免疫荧光定位发现普通烟草 4CL 1 蛋白特异性地在木质部表达. 为进一步应用木质部特异表达启动子定向调控 木质素生物合成奠定了理论基础. 关键词 :烟草 ;4香豆酸辅酶 A 连接酶 ;荧光免疫定位 中图分类号 :Q789 ; S572 文献标识码 :A Immunofl uorescent Local ization of 4Coumarate Coenzyme A L igase of N icot i a n a t ob acum FAN Bingyou1 ,2 ,L U Hai1 ,J IAN G Xiangning1 ( 1 College of Biological Science and Biot echnology ,Beij ing Forest ry U niver sit y ,Beij ing 100083 , China ;2 College of Agricult ure , He ’nan U niver sit y of Science and Technology ,L uoyang , He ’nan 47 1003 ,China) Abstract :4coumarat e coenzyme A liga se i s one of t he key enzyme s of lignin bio synt he si s in va scular p lant s. Soluble f u sed p rot ein of 4coummarat e coenzyme A liga se of P op u l us tom entos a ( Pto4CL 1) wa s acquired by p ro karyotic exp re ssion sy st em . SD SPA GE p urit y Pto4CL 1 p rot ein ,w hich wa s acquired by agaro se cou p led wit h Ni2 + N TA affinit y chro mato grap hy ,wa s u sed antigen to immune rabbit to achieve t he polyclo nal antibo dy . We st er n blot ting showed t hat t he polyclonal antibo dy of Pto