焦磷酸测序法检测HBV前C区基本核心启动子突变的临床应用.pdfVIP

·860· 主堡撞验匡堂盘壶2塑§生!旦筮!!鲞筮!翅垡!也!丛丛鲤：地趔塾塑!。!吐!!，奠垒! ．临床实验诊断研究． 焦磷酸测序法检测HBV前C区／基本 核心启动子突变的临床应用 姚蓝 宋家武信芝李啸峰吴洲清唐健熹郭波吴波赖人旭 【摘要】 目的建立一种新的基于焦磷酸测序技术的HBV前C区／基本核心启动子(p陀-C／ BCP)突变的检测方法，并验证该方法的准确性、重复性、可靠性及进行初步临床检测。方法通过对 基因库中100个HBV基因序列的比对分析，设计出专用的pm-c／BCP焦磷酸测序的PcR扩增引物及 测序引物，并以标准质粒作为标准品建立其相应的检测方法。通过对标准质粒及PcR扩增产物、经 S卸ger测序的HBV血清及基因芯片检测结果分析，以验证本检测方法检测的标本的特异度及本方法 的检测可靠性。最后对60例HBV临床血清标本进行了初步的检测。结果本研究成功地建立了 pre．C／BcP突变热点的焦磷酸测序方法。其检测结果与pre-c／BcP质粒，s锄ger测序法的检测结果符 合率达100％(惭=1．0)，基因芯片检测结果的诊断符合率为91．7％。同一批血清标本的重复率 达97．8％，阳性PcR产物测序的重复率100％。充分证明了本方法的准确性、重复性、可靠性。初步 批量化检测60份临床标本结果表明，本方法能一次批量检出包括pre．c／BcP的单一、多位点的突变， 并发现了一例少见的BCPT1758c突变。结论本实验所建立的pre．c／BcP突变热点的焦磷酸测序 方法是一种可一次性检测HBVp陀-c／BCP多位点突变的高通量的检测方法。 【关键词】肝炎病毒，乙型；启动区(遗传学)；基因，病毒；突变；磷酸类；聚合酶链反 应；寡核苷酸序列分析 B MD kn‘，5DⅣG-，如-批，删现i，Ⅳ航∞- brm辩quend吣ofp他-C／BCP咖t枷oⅡiⅡhe阳廿tis 扣粥．WUzhu’醉ng，TANGj记n．我，GUoBo，WU80，￡AlRe渺∞也’D睁s面nDeP矾凇m，￡沁F访h蝌沁ed 舶印i碰矿S虮y山一5饥踟觇舟毋，铂u捌5J9DDD，劬i胍 c0劂Po蒯增口砒Dr：．s0M肋-埘u，E僦如o，泓J@砌正踟址e也饥 7ro a tIIemutatio璐0fHBV 【Abstnn】objec廿Ve clinjcauyuseful鹊8ayf缸detectirIg p他一 develop C／BCPb鸹ed∞the w∞ p)∞8eqIlencing卸d∞cumcy，reproducibility蛳dreliabil崎ofthi8鹪8ay evaluate也Metho凼The HBV mu嘶onwere me tllmugll pyrosequencingprim啪forpre·c／BCP deBi印ed one of of cluster hundI_edHBV the analyBis枷∞g gene8equences．蛳ertIIe蛳puficationfragmentpre一(’／ BCP诵ththe 0f mutation me山odfor detection templatepre—C／BCP Pl聃mids，tIlepyrosequencingpre-C／BCP of set tKs