麻疯树核糖体失活蛋白curcin在大肠杆菌中高效表达条件的研究.pdfVIP

第 34 卷第 6 期 Vol. 34 , Issue　6 2009 年 3 月 　　　　　　 　 　 　 　 　　　　　　 　 　 　 　　M arch , 2009 麻疯树核糖体失活蛋白 curci n在大肠杆菌中 高效表达条件的研究 1, 2 2 2 1 罗孟军 , 陈　放 , 颜 　钫 , 刘伟信 ( 1. 成都市计划生育技术指导所 , 四川 成都 6 1003 1; 2. 四川大学 生命科学学院 , 四川 成都 6 10064) ( ) [摘要 ] 　目的:编码麻疯树毒蛋白 cu rcin 成熟蛋白的基因原核表达载体的构建及其高效表达条件的研究 。方法 :根据 GenB ank上麻疯树的 cDNA 序列设计引物 ,用 PCR 方法从麻疯树基因组中扩增得到编码麻疯树毒蛋白成熟蛋白的基因;将其 导入原核表达载体 pQE30, p ET32 中 ,并将其转入大肠杆菌获得重组菌株 。在不同诱导剂 、不同温度 、不同诱导时间等条件下 诱导其产生重组蛋白并进行检测比较 。结果 :用 PCR 方法从麻疯树基因组中扩增得到编码麻疯树毒蛋白成熟蛋白的基因 ,成 功构建了原核表达载体 pQER , p ETR ,并获得重组菌株 PRM , PRB 。在不同诱导剂 、不同温度 、不同诱导时间等条件诱导下 , PRB 均无重组蛋白产生 ,而 PRM 却能以包涵体的形式表达 cu rcin。结论 :重组菌 PRM 在诱导 6 h, 28 ℃, IPTG 05 mmo l ·L - 1 时表达 cu rcin 蛋白的效率最高 。 [关键词 ] 　麻疯树 ;核糖体失活蛋白;表达载体 ;大肠杆菌 ;诱导表达 　　麻疯树 J a trop ha cu rcas L. 是大戟科 Eup horb i 艺的报道 ,但原核表达系统的巨大优越性仍值得去 aceae麻疯树属 J a trop ha 的植物 ,其叶和种子可提取 尝试 。因此 ,本研究在前人研究的基础上 ,对编码麻 杀灭钉螺 [ 1 ] ,治疗创伤及癌症的药物 [ 2 ] 。在许多国 疯树毒蛋白 cu rcin 成熟蛋白的基因进行克隆、并构 家和地区麻疯树常被用于清热解毒 、消肿散瘀 。但 建其原核表达载体 ,通过采用不同的诱导条件优化 麻疯树种子对动物 ,如小白鼠[ 3 ] 、羊 [ 4 ] 及人 ,特别是 cu rcin 表达的最佳条件 , 为进一步研究利用 cu rcin 幼儿 [ 5 ] 表现 出毒性 , 且具有致死作用 。1976 年 , 奠定基础 。 Strip e首次从麻疯树种子 中分离出了麻疯树毒蛋 1　材料和方法 白[ 6 ] ,后来的研究证实了麻疯树种子含毒成分主要 1. 1　材料 ( ) 是种子毒蛋 白 cu rcin 。进一步的研究表明 ,麻疯 麻疯树种子采集于四川省攀枝花市 。大肠杆菌 树毒蛋白 cu rcin 是一种 I型核糖体失活蛋白,具抗 E. coli JM 109 , BL2 1 (D E3) 为四川大学生物工程实 癌活性 [ 7 ] ,是一种具开发成为新型抗癌药物潜力的 验室保存 。质粒载体 pMD 18T vector, pQE30 , p ET 蛋白。常规的获得蛋白质的方法是从种子中提取 , 32购 自大连宝生生物公司 。 这