相对定量RTPCR法中内对照基因表达水平的稳定性及其应用评价.pdfVIP

—·——716·-—— 文章编号：100r7—4287(2009)06—0716—05 相对定量RT．PCR法中内对照基因表达水平 的稳定性及其应用评价 梁志超1，陈江华2，刘志安2，刘敏1，蒋明3，赵建华2。 (江苏省肿瘤医院1．检验科；2．江苏省肿瘤医院、省临床检验中心；3．胸外科，江苏南京210009) 摘要：目的评价相对定量RT-PCR方法中不同内对照基因表达水平的稳定性及其对靶基因预后判断的影响程 用实时定量RT-PCR技术，分别检测内对照基因Beta-actin和GAPDH在不同时问的表达水平，并以CEAmRNA作为靶 基因，比较基于这两种内对照得出的靶基因相对定量结果用于患者预后判断的差异；标准化的绝对定量结果被作为 mR． “预后判断的参照标准”。结果在三个取样时间点，两种内对照基因表达水平的标准偏差依次分别为Beta-acfin NA：1．44，1．56和1．92；GAPDH mRNA 发结果表明，绝对定量法和基于Beta-aetinmRNA的相对定量法在预后判断中能够得到一致的结果，而GAPDH 的相对定量结果与复发之间未显示统计学意义的相关性(P0．05)。结论相对定量RT-PCR法中内对照基因表达 水平的变异程度低于10％时，才能保证内对照的有效性以及靶基因测定结果的可比性。基因表达研究时应对所用的 内对照基因表达稳定性进行前期评估。 关键词：食管癌；内对照基因；Beta-actinmRNA；GAPDHmRNA；实时定量RT-PCR 中图分类号：R73．3 文献标识码：A 0f controliIlrelative RT-PCRmethodantiits evaluation Expressionstabmty genes apptlcation endogenous quantitative LIANGZhi-cha01，CHENJiang-hua2，删Zhi-an2，et Sc／ence Chest Cancer 210009，China) tory and；3．D甲珊删ofSurgery，Jio嶝uHospital，Naming Toevaluatethe of levelsofdifferent controlanditsinfluenceOilthe Abstract：Objective stabilityexpression endogenousgenes of blood from36 caIlcer werecollectedbe- prognosisjudgetargetgene．MethodsPeripheralsamples 8quanlougesophagealpatients fore after at third levels the surgery(13-1)，immediatelysurgery(130)anddaypost-operatively(B+3)，respectively．Geneexpression of controlsbcna-actinandGAPDHatalltime were