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恒波长同步荧光法测定吐温80硫酸铵液固萃取体系中绿色荧光蛋白标记的融合蛋白.pdf
第29卷第l期 中南民族大学学报(自然科学版) V01．29NO．1
of
2010年3月 JournalSouth—Central forNationalities(Nat．Sci．Edition)Mar．2010
University
恒波长同步荧光法测定吐温80一硫酸铵液
固萃取体系中绿色荧光蛋白标记的融合蛋白
沈静茹1，靳光才1，余学红2，韦康1，林敏1
(1中南民族大学化学与材料科学学院国家民委分析化学重点实验室，武汉430074，
2中南民族大学校医院，武汉430074)
摘要培养了含六聚组氨酸绿色荧光蛋白修饰融合蛋白的工程菌，对从工程菌中收集的蛋白原液用普通荧光和
恒波长同步荧光2种荧光表征方式进行了比较。探究了分离蛋白的液固萃取体系中各因素(如硫酸铵浓度、吐温80
浓度、酸度)对蛋白质荧光特性的影响，确定了萃取体系中适用的恒波长同步荧光测定法．运用该法得到液相的工
作曲线线性相关系数达o．99935，固相工作曲线线性相关系数为0．99748，原始吐温80一硫酸铵液固萃取体系分离菌
中目标蛋白，一次萃取固相收得率可达41．31％，调节pH6．2时一次萃取固相收得率可达63．24％，进一步提高选择
性，加入聚乙二醇修饰物可提高至93．50％。
关键词蛋白分离；纯化≠液一固萃取；恒波长同步荧光
中图分类号 0657．31文献标识码 A文章编号 1672—4321(2010)01—0022-06
Determinationof GreenFluorescent
FusionProtein
Tagged
ProteininTween80一Ammonium Extraction
SulphateLiquid—Solid
Fluorescence
Systemby Synchronous
Constant—Wavelength
Shen Minl
Jingrul，JinGuangcail，YuXuehon92，WeiKan91，Lin
(1 of oftheStateEthnicAffairs of and
KeyLaboratoryAnalyticalChemistry Commission，CollegeChemistry
Materials for
Science，South-CentralUniversityNationalities，Wuhan430074，China；
2 forNationalities．Wuhan430074，China)
Hospital，South—CentralUniversity
AbstractThe bacterium of and fluorescent
engineeringconsistingsix—polyhistidinegreen
cultivated．Thefluorescenceand fluorescen
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