无核荔枝MADSbox基因LMADS1的表达与转化拟南芥分析.pdfVIP

第27卷 第4期 热 带 作 物 学 报 Vol.27 No.4 2006年 12月 Dec.2006 CHINESE JOURNAL OF TROPICAL CROPS 无核荔枝MADS box 基因LMADS1 的 表达与转化拟南芥分析 , 禤维言12 郑学勤1* 1中国热带农业科学院热带作物生物技术国家重点实验室 海口 571107 2广 西 大 学 农 学 院 南宁 530005 摘 要 根据多种植物MADSbox蛋白的MADS域的保守序列设计一对简并引物，采用RT-PCR和3′-RACE的 方法，从无核荔枝（ LitchichinensisSonncv.Seedless）花蕾中分离出1个687bp的基因，该基因的cDNA序列包含有 完整的MADSbox保守区与半保守的K区，是典型的MADSbox家族基因，命名为LMADS1，在Genbank上的登录 号为AY705793。Southernblot和Northernblot检测结果表明，LMADS1在无核荔枝基因组中以单拷贝形式存在，并 在雌花和雄花中表达。对该基因转化拟南芥的T代植株检测分析，转化植株未见有生育进程与花器官的改变。 1 关键词 无核荔枝 MADS box LMADS1 中图分类号 S667.103.6 被子植物的花通常由花萼、花瓣、雄蕊和心皮等4轮器官组成，通过对拟南芥与金鱼草的花同源异形 [1，2] 突变体的研究，Coen和Meyerowitz等人提出了花发育的ABC模型 .该模型指出，花器官的分化发育由 A，B，C三组组基因调控。A组基因控制萼片的分化，A组和B组基因共同控制花瓣的分化，B组和C组基 C组基因控制心皮的分化。此后，Theiβen等人对ABC模型作了补充，提出了花发 因共同控制雄蕊的分化， [3] [4] 育的ABCD模型 ，其中D组基因控制胚珠的发育 。在拟南芥中，A，B，C三组基因中的任何一个基因的 功能丧失或突变均会导致花器官性状的改变。ABCD模型中相关的功能基因大多数属于MADS-box基 [5] 因。MADS-box基因编码的蛋白质是一类转录因子，具有高度保守的MADS区域和半保守的K区域 。番茄的 MADS盒基因TM29既影响花的发育也影响到子房的发育[6] 。研究结果表明，大多数的MADS-box基因参 [7] ［8~12］ 与植物的成花调控 ，少数与植物的营养生长、胚胎发生、共生诱导和果实成熟有关 。海南无核荔枝则是 荔枝中的珍稀品种，有丰富的假种皮，种子多退化，无核率高达95%。荔枝的花有雌花、雄花和两性花3种 类型，雌花的雄蕊发育不正常，花丝较短、花粉无生活力。在海南无核荔枝中，两性花所占的比例很小，主要 依靠雌花结实，而3种类型的花不完全在同一时间开放，常导致雌、雄花花期不遇，使结实率降低。此外，海 南无核荔枝的无核率不稳定，影响了该品种的推广种植与经济效益。为了了解MADS-box基因对无核荔 枝开花结实的调控作用，笔者采用RT-PCR的方法从无核荔枝花蕾中分离出一个新的MADS-box基因 LMADS1，并对其表达模式及可能的基因功能进行了研究，为了解无核荔枝开花结实的分子机制及调控无 核荔枝的开花结实提供理论基础。 1 材料与方法 材 料 1.1 海南无核荔枝（ LitchichinensisSonnc