大鼠pEGFP_N1_PLZF真核表达载体的构建和意义.pdfVIP

6 Chinese Journal of Andrology Vol. 2 1 No. 8 2007 ·论 著 · 大鼠pEGFP-N1-PLZF真核表达载体的构建和意义* 华中科技大学同济医学院协和医院泌尿外科 （武汉 430022 ）夏 伟 白 杨 曾甫清 王振迪 华中科技大学同济医学院协和医院骨科 叶哲伟 摘要 目的 构建真核表达载体p EGFP -N 1-PLZF ，为基因水平研究早幼粒细胞白血病锌指蛋白 （PLZF ） 在精原干细胞增殖和分化中的调控机制提供理论参考。方法 参考分子克隆技术，采用RT-PCR 的方法从大鼠睾丸 组织中扩增PLZ F ，将该基因连接克隆到含有增强型绿色荧光蛋白 （EGF P ）报告基因的真核表达载体p EGF P -N 1 上，以构建重组质粒pEGFP-N 1-PLZF 。结果 实验从大鼠睾丸组织中提取总RNA, 以RT-PCR 方法获取编码PLZF 基因的全序列cDNA 。构建PLZF 的c DNA 真核表达质粒时将能发出绿色荧光的EGFP 报告基因融合在PLZF 基因， 并经酶切后DNA 电泳鉴定及DNA 测序证实结果。结论 构建重组质粒pEGFP-N 1-PLZF 成功，实验中将能发出 绿色荧光的EGFP 报告基因融合在PLZF 基因的3 ’ 端。提高PLZF 在真核细胞中的表达，而且不影响其目的蛋白的 结构和功能，对研究PLZF 调控精原干细胞增殖和分化机制具有重要的意义。 关键词 PLZF; 基因表达; 绿色荧光蛋白 中图分类号 E 321. 1 eukaryotic expression vector Xia Wei, Bai Yang, Zeng Fuqing, Wang Zhendi D ep artm en t of Uro logy , Un ion H osp ita l, Tongj i M ed ica l Colleg e, H uaz hong Un ivers ity of S cience and Tech nology, Wuhan 4 3 0022, Ch ina Ye Zhewei Dep artment of Rthop edics, Union Hosp ital, Tongj i M edical College, Huazhong University of Science and Technology Abstract Obj ective To con struct an eukaryotic expression vector named pEGFP-N 1-PLZF for researching the proliferation an d differention of sp ermatogonia. Methods Using the prim er s of PLZF gene and th e total RNA ex- tracted from the tissue of rat testes, RT-PCR was performed , the product was in serted to multiple clone sites of EGFP- N 1 vector by DNA recombin ant techinique. Th en a n ew eukaryotic expression recombinant p lasmid n amed PEGFP- N 1-PLZF was generated . Results Th e recomb in ant p lasmid carried PLZF and EGFP gen e by restriction enzym e cutting analy sis and DNA sequence an