艾灸对膝骨性关节炎的防治作用及其机理的实验的研究.pdf

中文摘要 目的 艾灸作为中医的外治法之一，具有操作简便，无痛苦、疗效明显的优 teoarthriti 点，在临床上治疗膝关节骨性关节炎(os S，OA)有较好的疗效， 是极具特色的中医治未病疗法之一。但是艾灸治疗膝oA的作用机理仍不 十分明确，尤其是对OA的预防作用研究尚未见报道。 因此，本课题在现代科学的方法论指导下，利用现代医学先进的实验 技术方法，采用膝关节改良伸直位固定法建立兔膝OA模型，运用艾灸对 正在进行造模的兔施以温和灸治，在造模8周后，对软骨标本行组织形态 学观察，检测关节液中白细胞介素-1D(IL-1D)和肿瘤坏死因子一0【(TNF- 1-2、Bax和P53蛋白 0【)的含量，测定软骨细胞凋亡率，观察软骨细胞Bc 表达，检测关节软骨中Bc1-2和Fas的mRNA表达，从组织、细胞、分子 等不同层面，探讨艾灸对兔膝oA的防治作用和机理，为临床艾灸防治oA 提供实验依据。 方法 4O只日本大耳白兔，随机分成4组，每组10只：艾灸组(A组)、几 固定法建立膝OA模型，A、B组在造模后立即进行干预，A组选取关元、 足三里、血海、内外膝眼、阳陵泉等腧穴，用艾条温和灸治，每天1次， 0mi 每次每穴1 n；B组用医用几丁糖(20mg／m1)予以膝关节注射，o．2ml／ 次，每周1次；C组不做治疗，D组正常饲养，不做任何处理。造模8周 后，各组分别从影像学、肉眼、光镜下、透射电镜(TEM)下观察兔膝关 节组织形态学情况，并用Mankin评分比较各组膝关节软骨的组织形态学 改变；用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测各组关节液中IL-1D和TNF- 1-2、Bax、P53 软骨细胞凋亡指数(AI)；免疫组织化学法(IHC)观察Bc 1-Time 蛋白表达情况；荧光实时定量PCR法(ReaPCR)检测各组关节软骨 III 中Bc1-2和Fas的mRNA表达情况。 结果 1．x片观察：h、B组关节间隙正常，未见骨赘生成，C组可见膝关节 间隙狭窄，局部有骨赘形成；大体肉眼观察：A、B组关节软骨表面光滑， 无软骨缺损，c组关节囊明显增厚，关节软骨呈灰黄色，局部出现溃疡； 光镜观察：h组软骨表面光滑，深层细胞排列规律，番红0染色轻度减弱， 潮线完整，C组软骨产生裂隙，深达辐射区，深层细胞数目异常，番红0 染色中、重度减弱，潮线模糊；Mankin评分：A、B组评分均明显较c组 超微结构接近D组，C组软骨细胞轮廓不清楚，胞膜坏死崩解，胞浆内细 胞器消失，细胞裂解为致密颗粒样物质，细胞固缩、变形，甚至出现核分 裂，染色质浓聚。 p含量和TNF-0【含量比B组稍低(P0．05)。 3．A、B组凋亡阳性细胞较少，散在分布于关节软骨浅表区，C组凋亡 阳性细胞较多，出现在关节软骨中深层。A、B组凋亡指数明显低于C组 (P0．01)；A组凋亡指数较B组低(PO．05)。． 4．Bc 组低于B组(P0．05)；Bc1-2／Bax：A组高于B、C、D组(P0．05)。 P5 低(P0．05)。 5．Bc卜2 7±1．1 9倍，A、B组和C组Bc1-2的mRNA表达 倍、1．2 5倍、1．08±0．8 Fas mRNA的相对表达量，A、B、C组分别为D组的0．27±0．07倍、0．31 ±1．1 常显著意义(P0．01)，h组和B组差别无显著意义(P0．05)。 IV I I i smofMoxi i on i menta onEffectandtsMechan bust Exper Study