栓菌420漆酶C基因的克隆高效表达及重组酶的染料脱色潜能.pdfVIP

卷 期 ! # 微 生 物 学 报 !（）： # ! ’ ( 年 月 日 $%% $ ! !#$ %’()(*(+$ ,-$ ! )*+,-.,/ $%% !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! 栓菌 漆酶 基因的克隆、高效表达及重组酶的染料脱色潜能 !# $ 李剑凤，洪宇植，肖亚中 （安徽大学生命科学学院和现代实验技术中心 合肥 $0%%02 ） 摘 要：根据漆酶铜结合保守区氨基酸序列设计简并引物，从新型漆酶合成菌株栓菌 （ ）基因组 !$% !#$%%’ CD !$% 扩增得到一新的漆酶同工酶基因（ ）片段，应用长距离反向 技术获得其两端侧翼序列。克隆得到的 EFG (#)* HIJ 序列长 ，包括长 的开放读码框及 和 非编码区。 序列长 ，编码一 的多 (#)* 01!%+D $$10+D K 0K5 (#)* @EFG #1%+D #2.. 肽。推导的 蛋白序列内部存在有 个潜在的 糖基化位点和 个铜原子结合区。将不含自身信号序列的 L.@I #% F5 ! 以 载体为媒介克隆到表达载体 上，转化毕赤酵母（ ） 细胞。重组菌在含 (#)* @EFG DHMI2 DHMI2N +,)-,# . #’/,’ OP## 有 和 丙氨酸的 培养基中 培养 ，重组漆酶（ ）产量达到 ! 。用发 % Q088;4R L I-PS % Q(T UVV $%W 2? ,L.@I #Q1$ X #% YR L ! 酵粗酶液对终浓度 的染料进行脱色实验，结果表明， 的 对测试的三甲基类和偶氮类染料具有良 %8ZR L 1YR L ,L.@I 好的脱色作用，小分子介体GU3P 和[U3 能够提高,L.@I 对染料的脱色效率和脱色速度。 关键词： ；真菌漆酶；异源表达；染料脱色 !#$%%’ CD !$% 中图分类号： ； 文献标识码： 文章编号： （ ） \( \201 G %%%#51$%2 $%% %#5%%!5% 人工合成染料在使用过程中约有 # T 被作为 本文报道该研究结果。 废弃物排放到水环境中，传统的物理化学方法处