液液双水相萃取分离α淀粉酶研究.pdfVIP

兰』兰垒兰三=翟二—， 簦垒曼型兰2 蚤薹趟堑壅 ．一 液一液双水相萃取分离口一淀粉酶研究 邱树毅 贵州工业大学轻工系 550003 酶浓度等影响因素进行了研究。 关健词液．液双水相分离萃取a．淀粉酶PEG磷酸盐 The Abstracts behavior in WS Theeffectsof‘the partition ofⅡ-amylaseaqueoustwo-phasesysternsinvestigated andconcentrations and concentrationsofNaCI concentrationOnthe weights ofpolyethyleneglyc01．pH，the enzyme K coefficientwerestudied． partition words Partition PEG Key Aqueoustwo-phase d—amylase Phosphate 双水相萃取技术是分离纯化蛋白质混合物等生物 其他试剂均为市售分析纯。 大分子的有效方法。双水相系统通常是由水溶性的两 】．2实验方法 种聚合物组成或一种水溶性聚合物与一种盐组成，与 1．2．1 PEG，磷酸盐双水相系统相图 一般分离纯化技术相比，双水相技术具有处理容量大、 将不同分子量的PEG和无机盐制成一定浓度原液， 能耗低、易连续化操作和工程放大等优点，在蛋白质、 准确称量一定量PEG原液，加入试管中，然后加A无 酶、核酸等生物大分子的分离纯化等方面受到广泛重 机盐原液，混合，直至试管开始出现混浊为止。称量加 视，是一种有发展潜力的易于工业化应用的生物分离 入无机盐量，算出PEG和无机盐在系统中的重量百分 技术…。 浓度，再加入适量水，使体系变清澄．计量加入的水． 生物大分子在双水相上相和下相的浓度比被定义 并继续加入无机盐，使系统再次变混浊，如此反复操 为分配系数(K=C 作，计算达到混浊时PRG和无机盐在系统中的重量百 影响分配系数，包括系统本身的因素如系统组成、聚 分含量，得出PEG和磷酸盐的双节线相图(图1)。 合物分子量、聚合物浓度、盐和离子强度、pH等，以 及目标产物的性质如疏水作用、电荷、分子量等，尽 管目前对聚合物溶液热力学引起的生物大分子在两相 间不规则扩散的机理还不清楚，还没有相应的理论指 导设计特定蛋白质和生物大分子的分配系统，但是利 抻20 用双水相技术，通过大量实验研究，是可以获得特定 蛋白质和生物大分子的最适宜分离的相系统和最优分 m 配的【2】。 LO O一淀粉酶是广泛应用的生物酶类，B．Subtilis细 菌。．淀粉酶是研究和应用较多的“一淀粉酶，其分子 量为48000道尔顿，PI约为5，最适pH5．3—6．4，在 pH4．8～8．5之间稳定【31。实验研究了n-淀粉酶在聚乙 K，PO‘／wt％ 二醇(PEG)／磷酸盐双水相系统中的分配，对PEG分 图I PEG／KjPO。双水相相图 子量、PEG浓度、pH、添}Jl／NaCI和酶浓度等因素对a一 淀粉酶分配系数的影响进行了研究。 1．2．2双水相萃取分配平衡实验 相系统用原液冰箱放置，使用时所有原液先在20 1材料和方法