生物素化HCV抗原的标记率提纯纯度及活性检定.pdfVIP

维普资讯 · 680· 学 究熏志 JournalofChineseMedicineResearch 2007年第7卷第8 · 论 著 · 生物素化 HCV抗原的标记率、提纯纯度及活性检定 王国华，宋晓国，陈 坤，冯晓燕，修冰水，何 竞，朱翠侠，张贺秋 【摘要】 目的 建立生物素标记HCV抗原及质量检定方法，研制双抗原夹心检测HCV抗体试剂。方法 用长臂生 物素标记修饰过的HCV抗原，采用Avidin亲和层析柱方法计算标记率，SDS—PAGE检测纯度，酶联免疫测定活性。结果 生物素化HCV抗原的标记率为99．15％，纯度96．02％，用于检测抗 HCV国家参考品，符合标准要求。结论 生物素化 HCV抗原可用于双抗原夹心抗 一HCV检测。 【关键词】 生物素化；HCV抗原；标记率；纯度 【中图分类号】 R446．6 【文献标识码】 A 【文章编号】 1680—6115(2oo7)os—o68o一03 LabelingrateofthebiotinalizeHCV antigen．extractedpurityandtheactivity detection WANGGuo—hua，SONGXiao～guo，CHENKun，eta1．ResearchRoomofDiagnosisand cci船，MilitaryMedi— cineInstitute，Beijing100850，China 【Abstract】 Objective ToestablishthebiotinlbaelingHCVantigennadthemethodofqualityarbitration。to estba lishthedoublenatigensandwichdetectionHCVnatibodykit．Me~ods longarlnbiotinlbaelingHCVnati— genwhichismod ified，toadopthteavidinaffinitycoluIIlnmethod tocomputesignrate．SDS—PAGE detection purityquotient，EUA liveness．Results Thesing rateofbiotinylationHCV na tigenis99．15％ ，purityquotient is96．02％ ，naditisusedfordetectinghtenational ofnati—HCV pnael，tocomplywiht astnadardofrequest． Condusibn BiotinlbaelingHCV natigenmayusedfordoublenatigensnadwichnati～HCV detection． 【Keywords】 biotinalization；HCVnatigen；lbaelingrate；purity 目前检测丙型肝炎病毒抗体仍采用间接酶联免疫法 ， Systemlot#226425，size1ml。(2)紫外分光光度仪：Spectronic 但存在一定的假阳性及漏检 ，而HIV和梅毒抗体 的检测均 GeneSys2。(3)缓冲液 (按说 明书配制)：0．1MNaPO4，pH 采用双抗原夹心方法，主要由于标记HCV抗原的技术存在 7．0。(4)洗脱液(按说明书配制)：10％ 冰醋酸。 一 定的困难，致使标记后的HCV抗原活性降低。难于建双 1．3 方法 (1)标记抗原用分光光度法定量 (测定 A280 抗原夹心检测抗一HCV。我们在HCV嵌合抗原的基础上， 光吸收值)：标记抗原用缓冲液稀释 1O倍后，测 A280值 以不同方式融合上4个赖氨酸，作为标记长臂生物素连接 (TA)。(2)亲和层析柱：装一层析柱，用缓冲液 10ml平衡， 臂，以链霉亲和素标记辣根过氧化物酶(HRP)，建立生物 备用。(3)上样与洗柱 ：取标记抗原0．5ml，轻轻加在亲和 素化抗原 一链霉亲和素双抗原夹心(ELISA)检测丙型肝炎 柱表面，按说明书，慢慢进入柱