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环介导等温扩增技术及在感染病诊断中的应用.pdf
中国卫生检验杂志 2008年 9 月 第 18卷 第 9期 Ch inese Journal of H ealth L aboratory Technology, Sep 2008; Vol 18 No 9 1933
【综述 】
环介导等温扩增技术及在感染病诊断中的应用
汪一帆 , 郭潮潭
(浙江省医学科学院生物工程研究所 ,杭州 310013)
[关键词 ] 环介导等温扩增 ;感染病 ;检测
[中图分类号 ] Q78 [文献标识码 ] A [文章编号 ] 1004 - 8685 (2008) 09 - 1933 - 03
自古以来 ,感染一直威胁着人类健康与生命 。近年来 ,经
典传染性疾病的发病率有所下降 ,但艾滋病 、传染性非典型肺
炎 、人类禽流感及人类猪链球菌感染等新发感染病成为新的
公共卫生问题 。病原微生物通过不同方式引起人体发生感染
并出现临床症状 。一些常规的病原微生物检测方法由于耗时
费力 、步骤繁琐等不足之处 , 已经愈来愈难以满足人类对致病
微生物快速 、简易、高特异性的鉴定要求 。因而聚合酶链式反
图 1 LAM P反应引物设计图
( )
应技术 PCR 问世后得到了广泛应用 。之后发展起来的荧光
12 反应机制
定量 PCR 分子诊断技术 ,更是具有实时监测 、定量准确 、反应
DNA 在 65 ℃左右处于动态平衡状态 ,任何一个引物向双
速度快 、重复性好等优点 ,但因价格昂贵该技术的普及受到限
链 DNA 的互补部位进行碱基配对延伸时 ,另一条链就会解离 ,
制 。
[ 1 ] 变成单链 。反应中链置换型 DNA 聚合酶 ,能使后阶段退火的
2000年 ,Notom i等 开发了一种新颖的恒温核酸扩增方
引物置换前面引物所形成的链 ,在其作用下 , 以 F IP 引物 F2 区
(
法 ,即所谓 的环介导等温扩增法 Loop - M ediated Isotherm al
段的 3 末′端为起点 ,与模板 DNA 互补序列配对 ,启动复制一
) (
Amp litlcation, LAM P 。其利用一种链置换 DNA 聚合酶 B st
条新链 。F3 引物与靶 DNA 的 F3c序列杂交 ,又通过链置换型
)
DNA polym erase 和两对特殊的引物 ,特异地识别靶序列上的 6
DNA 聚合酶的作用 ,开始靶 DNA 互补链的合成 , 同时置换出
( )
个独立区域 ,在等温条件下 65 ℃左右 保温几十分钟 , 即可完
F IP 引物合成的 DN
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