碧云天细胞凋亡一步法TUNEL检测试剂盒.pdfVIP

一步法TUNEL 细胞凋亡检测试剂盒 产品编号 产品名称 包装 C1086 一步法TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(绿色荧光) 20次 产品简介：  碧云天生产的一步法TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(One Step TUNEL Apoptosis Assay Kit)为您提供了一种高灵敏度又快速简 便的细胞凋亡检测方法。对于经过固定和洗涤的细胞或组织，只要经过一步染色反应，洗涤后就可以通过荧光显微镜或流 式细胞仪检测到呈现绿色荧光的凋亡细胞。  细胞在发生凋亡时，会激活一些DNA 内切酶，这些内切酶会切断核小体间的基因组DNA 。细胞凋亡时抽提DNA进行电泳 检测，可以发现180-200bp 的DNA ladder 。基因组DNA 断裂时，暴露的3’-OH 可以在末端脱氧核苷酸转移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT) 的催化下加上绿色荧光探针荧光素(FITC)标记的dUTP(fluorescein-dUTP)，从而可以通过 荧光显微镜或流式细胞仪进行检测，这就是TUNEL(TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling)法检测细胞凋亡的原理。 注：FITC是fluorescein isothiocyanate 的缩写，实际上大多数情况下所谓的FITC 即为fluorescein 。  本试剂盒有如下优点。(1) 高灵敏度：可以在单细胞水平检测到细胞凋亡，同时由于凋亡早期就有DNA断裂，可以检测到 早期的细胞凋亡。(2) 特异性：TUNEL检测时通常更容易标记凋亡细胞，而不容易标记坏死细胞。(3) 快速：仅需约1-2个 小时即可完成。(4) 方便：只需一步染色反应，洗涤后即可观察，不必使用二抗等进行多步操作。(5) 应用范围广：可以用 于检测冷冻或石蜡切片中的细胞凋亡情况，也可以检测培养的贴壁细胞或悬浮细胞的凋亡情况。  TUNEL法特异性检测细胞凋亡时产生的DNA 断裂，但不会检测出射线等诱导的DNA 断裂(和细胞凋亡时的断裂方式不 同) 。这样一方面可以把凋亡和坏死区分开，另一方面也不会把射线等诱导发生DNA断裂的非凋亡细胞判断为凋亡细胞。  极少数细胞凋亡时没有DNA断裂，此时不适用TUNEL法检测。在个别类型的坏死细胞中也发现TUNEL检测呈阳性。在需 要严格判断细胞凋亡的情况下，最好同时检测多个凋亡指标。  本试剂盒足够检测20个样品。 包装清单： 产品编号 产品名称 包装 C1086-1 TdT酶 40μl C1086-2 荧光标记液 960μl C1086-3 TdT酶稀释液(选用) 500μl — 说明书 1份 保存条件： -20 ℃保存，荧光标记液需避光保存。 注意事项：  需自备用于洗涤细胞的PBS或HBSS ，用于封片的抗荧光淬灭封片液(P0126)，用于固定的4% 多聚甲醛或向碧云天订购免 疫染色固定液(P0098)，同时需自备含0.1 ％Triton X-100的PBS或向碧云天订购免疫染色洗涤液(P0106) 。  如果用于石蜡切片的检测，需自备蛋白酶K，二甲苯。蛋白酶K(ST533)可以向碧云天订购。  为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 使用说明： 1. 对于贴壁细胞或细胞涂片： a. PBS或HBSS洗涤一次。 b. 如果细胞贴得不牢，可以干燥样品使细胞贴得更牢。 c. 用4%多聚甲醛或碧云天生产的免疫染色固定液(P0098) 固定细胞30-60分钟。 d. 用PBS或HBSS洗涤一次。 e. 加入含0.1 ％Triton X-100的PBS或碧云天生产的免疫染色洗涤液(P0106)，冰浴孵育2分钟。 f. 转步骤5 。 2. 对于悬浮细胞或细胞悬液： a. 收集细胞(不超过200万细胞) ，PBS或HBSS洗