神经生长因子抗体亲和柱的制备与应用.pdfVIP

第 l9卷第 5期 暨南大学学报 (自然科学版) V0l_19 No．5 1998年 1O月 JournalofJinanUniversityfNaturalScience) Oct．1998 神经生长因子抗体亲和柱的制备与应用 l叶～ 川 陈洁刘春宇卢军林剑 至_王’究所，510632，广州) R 7J／ 摘 要： 利用已分离纯化的神经生长因子 (NerveGrowthFactor，NGF】为抗原，镧各兔抗NGF 抗血清，用饱和 (NH．) o．盐析和ProteinA亲和层析的方法，纯化其 中的IgG组分，再将其偶联 到经 CNB／活化的Sepharose4B上，镧成抗NGFIBG免疫亲和柱．应用此亲和柱可一步纯化蛇 毒中的NGF，太大简化了NGF纯化工艺． 关键词：苎竺兰兰里 ；生 抗NGFIgG亲和层析 佛j书 中圈分类号： Q503；Q511 { 神经生长因子 (NerveGrowthFactor，NGF)是最早发现和最典型 的神经营养因子，它 对神经系统和非神经系统均有重要的生物学效应 ；临床研究意义重大，因此人们不断从 各 种来源的蛋 白质中分离纯化NGF，这项工作非常烦琐，必须经过好几步的纯化步聚 ．本文 利用抗NGF IgG亲和层析来进行NGF的纯化，大大简化了纯化工艺，所得到的产品同传统 方法相 比，同样令人满意． 1 材料 NGF抗原为本所用传统方法从 中华 眼镜蛇蛇毒 中分离纯化得到 的．NGF标准 品为 2．5S 鼠源 NGF，购 自Premega公司 ．标准抗 NGF单抗购 自Premega公 司．2月龄雄性新西兰兔 购 自本校动物所．费氏完全佐剂购 自Sigma公 司．ELISA检测试剂盒为本所产品．CNBr活化 的Sepharose4B为 Pharmacia产 品．标准兔 IgG购 自军事医科 院微生物流行病研究所 ．其他 试剂为国产分析纯试剂． 2 方法与结果 2．1 兔抗 NGF抗血清的制备 采用经典方法I81，分 4次皮下、肌 肉、静脉注射NGF抗原到新西兰兔体 内，用 ELISA方 法 检测抗血清效价．待抗血清效价高达 1：l6000后，心脏采血，离心后得到抗血清． 2．2 抗NGF lgG组分的纯化 用 33％饱和度的(NH4)2s04盐析上述抗血清，得到粗品；再用ProteinA—SepharoseCL 4B亲和层析进行精细分离，得到抗 NGF IgG 纯品 【．平衡液为 002mol／LPB，pH 7．8， 收稿 日期：l997-01—16 广东省 自然科学基金资助项 目 1)第一柞者：女，1968年 5月出生，硬士研究生；主要研究：向：分子生物孝厦生物化学 第5期 陈 洁等：神经生长因子抗体亲和柱的制备与应用 古0．1mol／LNaCI；解吸液为0．1mol／LHCl—Gly缓冲液，pH3．0． 2．3 抗 NGF IgG组分的鉴定 0 群 篓 誉豁 餐群 } (1)采用 自然 电泳法，即电泳系统中不古SDS和巯基 乙醇 ．分离胶浓度为 l0％，以标准兔 IgG为阳性对照，结果如图 l所示，纯化抗体和标准兔 IgG处于 同一水平位置；(2)采 用常规 sDS一聚丙烯酰胺凝胶电泳，结果如图2所示，纯化抗体形成两条带，相对分子质量为28000 和 5