粉防己碱拮抗α石英细胞毒性的机理.pdfVIP

维普资讯 第 3期 无 机 化 学 学 报 V叫 lj．No．3 999年 5月 CHINESE JoURNAL OF INORGANIC CHEM ISTRY May． 199g 享 棚 手 京大学配 究 配 化学国家重点实验室，南京 210093) 1 羞 詈 关键诃 粉防己碱 肺一 兰 分类号 06l3、72 丰 粉防己碱在 医学上主要用于心血管方面的治疗 ，是一种非选择性钙通道阻断剂uJ。现在国 内外医学界也正在进行粉防己碱防治硅肺的研究，以往的一些研究表明，粉防己碱能减少硅肺 的病变组织中胶原蛋 白含量 ，从而抑制硅肺纤维化进展 ] 粉防己碱作用于实验性硅肺大 鼠 后，可 以减轻硅肺症状，改善硅肺大 鼠的肺功能口]。但 由于客观条件的限制，还没有人将其拮抗 石英细胞毒性的作用与细胞内钙浓度联系起来。过去我们的研究发现钙离子在硅肺发生过 程 中起着重要的作用 ]。我们在此基础上研究了 石英诱发细胞毒性过程中，不同外钙浓度 时 ，粉防己碱作用后，细 胞存活率与胞浆游离钙浓度的变化关系，对粉防 己碱拮抗n一石英细胞 毒性的机理进行了初步探讨 。 l 材料与方法 1．1 主要仪器与试剂 ARCM—M1C阳离子测定系统 (美国SPEX公司)：AFX—DX型倒置荧光显微镜 (日本 Nikon 公司)；1815TC型CO 气流培养箱 (美国Shelter公司)。标准 石英粉尘(粒径小于 5m，含游离 SiO 97．7 )，中国预防医学科学院；Fura一2／AM、RPM1—1640干粉培养基．台盼蓝、N一2羟 乙基 哌嗪一N一一2r一乙烷磺酸 (HEPES)为进 口分装生化试剂 粉 防己碱由中国药科大学药化室提供 ，其 它试剂 ，均为分析纯或生化试剂 。所有实验用水均为重蒸水 。 1．2 肺泡巨啦细胞 提取家兔巨噬细胞，用RPM1—1640培养液或HEPES缓冲液配成浓度为 1×10个／mL的细 胞悬液。无钙培养液和缓冲液的组在中除不含CaC1外，还需另外加 0．1mrnol·L 。的 EGTA， 其它组成相同。高钙培养液和缓冲液[ca”]分别为正常值([ca ]一I 6mmol·L )‘的2倍 和 4倍 。 。 收搞 I：1期 收修改稿 日期 lj998—0616 国家 自然科学基盘资助项 目(No 通讯联系^。 第 一作者：朱卫华 ．男，29岁，现为镇江医学院讲师；研究方向：生物无机化学 维普资讯 第 3期 朱卫华等 ：粉防己碱拈抗 石英细胞毒性的机理 ·3l1 · ． 3 试样和试剂 的预 处理 石英 临用前用紫外线照射 30rain，用生理盐水配成 5mg·mL。。悬浊液 ；粉 防己碱用生 理盐水配成 0．5mmol·L 溶液 ；所有使用的溶液均需经过 5#砂芯漏斗抽滤除菌。 1．4 细胞存活率测定 分别取 0．9mL细胞悬液于细胞培养瓶 中，对照组加 1O0 生理盐水 ；n一石英组分别加入 石英悬液 8O 、4O 和 20uL；o一石英加药组还需加粉防己碱溶液 各组均用生理盐水调终 体积为 1．0mL，均在 37c、CO 5 的培养箱温育 ，分别取温育 4、12、24h细胞培养液，用台盼 蓝斥分法计数细胞存活率 。 1．5 细胞浆游离 ca 浓度([ca“]，)的测定 在 5×10个 ／mL的细胞悬液 中，加入 Fur