膀胱癌尿液脱落细胞角质素mRNA表达检测方法的建立.pdfVIP

维普资讯 2003年 6月第 8卷第 3期 ChineseClinicalOncologv，June．2003，VoL8，No．3 膀胱癌尿液脱落细胞角质素 mRNA表达检测方法的建立 200040 上海 复旦大学泌尿外科研究所 燕 翔，丁 强，张元芳，蓝 斐 【摘 要】 目的：建立采用RT—PCR对膀胱癌尿液脱落细胞 CK8和 CK20的mRNA表达进行分析的实验方法。方法：从 22例膀胱癌患者尿液脱落细胞中提取总 RNA，采用 RT—PCR和特异性引物进行逆转录、扩增 ，并用琼脂糖凝胶电泳进行分析。 结果：从所有标本中提取的总RNA均有较好纯度和均一性 ；22例标本均表达CK8mRNA，18例标本表达 CK20mRNA。结论： RT—PCR是一种敏感、快捷的检测膀胱癌尿液脱落细胞中CK8、CK20mRNA表达的方法 ，可采用此方法从分子水平对膀胱癌患 者尿液脱落细胞表达产物进行无创性检测 ，为研究膀胱癌的发病机制、生物学行为和探索膀胱癌早期无创性诊断方法奠定了 实验基础。 【关键词】 膀胱肿瘤 ； 尿液脱落细胞 ； 细胞角质素； RT—PCR 中图分类号：R737．14 文献标识码：A 文章编号 ：1009—046o(2003)03—0161—03 EstablishedamethodofdetectingtheexpressionofCK8andCK20 InRNA inexfoliatedbladdercells YANXiang，DINGQiang，ZHANGYuan-fang，eta1．InstituteofUrology，FudanUniversity，Shanghai 20o040 A【bstract】 Objective：ToestablishanexperimentalmethodfordetectingtheexpressionofCK8(cytokeratin8)andCK20 (cytokeratin20)mRNAinexfoliatedbladderceHswithreversetranscription—polymerasechainreaction(RT-PCR)．Methods：CeHs wereobtainedfrom urineof22patientswitllbladdercancerconfirmedbybladderbiopsy．TRIzolreagentwasusedtoisolatetotalRNA from hteexfoliatedbladdercells．TheAccessRT—PCR system Was perfomr edtoreversetranscripthtemRNA na damplifyhtecDNA witllspecialprimersofCK8nadCK20respectively．RT—PCR productswerenaalyzedbyagarosegelelectrophoresisna dehtidium bre- midestainingagainstPCR sizemarkers TheresuhsweredocumentedwithacameraResults：Th etotalRNA isolatde from hteexfolia． tedbladdercellsWasintegralnadpurenadtheyieldoftotalRNAWasalsoidea1．CK8amplification(244basepairs)nadCK20ampli— fication(370basepairs)wereobtmnedwithtotalRNA．Allthe22specimensexpressthemRNAofCK8nadinwhich18specimens expresshtemRNA ofCK20．Conclusion：RT—PCRisasensitive，rapidandnoninvasivemehtodofdetectinghteexpressionofCK8na d CK20mRNA inexfoliatedbladdercells．Itmayprovideallexperimentalmethodforstudyinghtemechnaism