蛋白质体外表达与进化技术.pdfVIP

《生命的化学》 年 卷 期 2005 25 4 技术与方法 · · ● 333 CHEMISTRYOFLIFE2005,25(4) 文章编号：1000-1336(2005)04-0333-03 蛋白质体外表达与进化技术 王长松 刘友生 陈燕平1 1 （第三军医大学西南医院病理学研究所，重庆 400038；西南医院国际合作实验室，重庆 400038） 摘要：蛋白质体外表达与进化技术包括核糖体展示技术和mRNA展示技术。与蛋白质体内表达系统相比，体 外表达技术可产生较大容量的蛋白质文库 （约 12 13左右），同时在回收编码蛋白质的信息时对文库进行了 10～10 进化，增加了蛋白质文库的多样性，促进了抗体或配体类蛋白质的亲和成熟能力。该文介绍了蛋白质体外表达 技术在新蛋白质 （如抗体或配体等）表达筛选中的应用。 关键词：蛋白质体外表达；核糖体展示；mRNA展示；进化 中图分类号： ； Q51 Q816 从 世纪 年代至今，产生了多种筛选肽 唯一的不同之处在于 和蛋白质在复合体中 20 80 mRNA 或蛋白质文库的新技术，这些技术方法大多以表 的连接方式不同，在mRNA展示中二者通过一个 面展示来命名，如细胞表面展示、质粒展示和酵 小的连接分子形成共价连接，而核糖体展示中 母双杂交系统等。因为有活细胞参与文库的生成 mRNA、核糖体和新生蛋白质之间采用一种稳定 或筛选过程，这些方法都属于体内表达系统。但 的非共价连接。蛋白质体外表达系统代替体内表 是由于转化（ ）的限制，这些文库的库 达系统将更有利于研究蛋白质的功能，体外表达 transformation 容量大多在 9左右，在一定程度上影响了蛋白质 技术和基因芯片技术的发展正逐渐成为大规模分 10 文库的亲和成熟。无细胞翻译系统———核糖体展 析蛋白质的有效工具。 [1] 示技术和mRNA展示有效地解决了这种缺陷 。无 1.体外表达与进化技术的特点 细胞翻译系统是在翻译的过程中将蛋白质的表型 1.1核糖体展示及影响因素 和体内表达系统 和基因型偶联在一起，即把编码新蛋白质的 相比，核糖体展示技术有一些潜在的优点，如易 mRNA和新生蛋白质自然地联系起来。核糖体展 构建大容量的文库；减少由于细胞内表达所产生 示技术应用不含终止密码子的mRNA来表达蛋白 的差异性；更易于产生突变等。核糖体展示技术 质，并和核糖体形成蛋白质 核糖体 （ 基于 提取物或兔网织红细胞系统，可用于 - -mRNA pro- E.coli ， ）三联复合体。 表达和筛选具有特异结合能力的功能性单链抗体 tein-ribosome-mRNA PRM mRNA 展示也是将 及其编码的多肽作为一个筛选 （