顺铂与F肌动蛋白的结合方式的LMCT谱研究一.pdfVIP

证学学报 AOTA CttIMICA SINICA 19娩，50，685--690 战 顺铂与F一肌动蛋白的结合方式的LMCT谱研究 — 王 夔 曾慧慧’ 王 剑 李荣昌 - — 医再j 每院，北京，Z00083) 本文根据顺铂及顺铂与F一肌动蛋白电子光谱 中电荷转移谱带研究了顺=氨 台铂 (II)离子与 F一肌动蛋白的结合方式及构型．将所得光谱解析为个别吸收谱带，并与按不同构型、不同配位原子 计算结果相比较，结果表骋，铂以平面四方形构型主要与两个氨分子、一个硫和一个氨基氮配位． 关键词：顺铂，F一肌动蛋白 旦鱼 !塑． 一 直认为顺铂 s-Pt(NH,)2al2]的抗癌作用是其水解产物与 DNA分子中乌瞟呤碱基 配位BI起交联所致．我们 曾指出，当胍铂或其水解物进攻细胞时，细胞的应咎应是细胞 内各种 不 同分子参与的多种反应的总结果 ．在细胞的靶分子中，细胞骨架蛋 白受影响较大．苏雅 娴等 用罗丹 明一鬼笔环肽标记细胞丝状肌动蛋 白确定了顺铂配合物会引起它的重组和解 体， 这种变化可能在抑制或杀伤癌细胞中起作用． 因此。有必要在分子水平上研究顺铂与有关蛋 白的相互作用 以及铂结合引起的蛋 白构象变化．本文根据 UV差谱研究了顺铂和肌动蛋 白的 相互作用的电荷转移谱带；并用 LMOT跃迁能公式归属了在 UV谱上洌得的 LMOT跃迁；从 丽确定了顺铂和肌动蛋 白存在着相互作用，得出了结合产物的构型和配位基团． 实 验 仪器 用岛津UV260紫外可见分光光度计，SDS一聚丙烯酰胺凝胶电泳仪． ． 试剂和材料 肌动蛋白(F—aorat)按 Pardee等报道 从家兔骨骼肌中用丙酮提取，并经 蔡合、解聚、再聚合法制备．所得肌动蛋 白用 电泳法鉴定，呈现单带，与标准分子量系列比较， 产物相对分子量为 曲0O0，与F一肌动蛋 白一致．纯度符合要求． 三磷酸腺苷二钠 (Na,ATP)和叠氮化钠 (NaN8)为Merek试剂，顺铂 (DDP)为齐鲁制药 厂产品，巯基 乙醇为化学试剂，其余试剂均为分析纯试剂． 澳I试方法 为测定顺铂结合F一肌动蛋 自形成的配合物的LMOT谱，配制了顺铂浓度 为 1_7×10 mol·L_。F一肌动蛋 白浓度为 1．×10 mol·L 的pH一7．4(磷酸缓冲溶液浓度 为 0．85mol·L )混台溶液．混合后避光放置不同时间，室温下记录 舯0—400nm 范围光谱． 测 试 结 果 LMOT结果见图l(3h以前的光谱略去)． 由图1可见，代表 NHa配位的230nm峰位 基本不变，而在 ~50--350nm 范围宽峰表现略有不同．6h以后趋于稳定． 根据 以上结果，选择反应时间24h，测定上述溶液的光谱．为消除游离顺铂的影响，在仪 1991年 8月26臣收到．本谭题为国家教委博士点基盍爱国京基础研究重大=哽日资助项 目． 化学学报 ACTA O]KI~[IOA SINTOA 1卯皇 klnm 圈 l 顺铂(DDP)与肌动蛋 白作用 图窖 顺铂 (DOP)与肌动蛋白作用 24h的 V 差谱 3h，6h，24h后紫外光谱 (曲线下十字代表拆分出的谱带，横线代表半峰宽，竖线代表峰高) 器上减去了同浓度顺铂的对应光谱，并以同浓度肌动蛋白为空白．所得差示光谱见图2． 用计算机程序 拆分得以下几个吸收带： 峰高 (A) 最大吸收波长(nm) 半峰宽(nm)