人参细胞悬浮培养中蔗糖和无机盐对皂苷生产的影响.pdfVIP

第 33卷 第 2期 2011年 6月 VoI．33NO．2 Jun．2O11 人参细胞悬浮培养中蔗糖和无机盐对皂苷生产的影响 高 日， 朴炫春 ， 于晓坤 ， 金星爱。， 廉美兰 (1_延边大学长 白山生物功能因子省部共建教育部重点实验室；2．延边特产研究所 ：吉林 延吉 133000) 摘要 ：通过研究人参细胞悬浮培养过程中培养基蔗糖浓度 、MS浓度 、氮浓度及硝态氮与铵态氮 比例对细胞生 长及皂苷合成的影响，发现在培养基中添加 30g／L蔗糖 时，人参细胞合成皂苷能力最强，蔗糖浓度过低 (10g／L)或过高(70g／L)均不利于细胞干重增加及皂苷积累．MS培养基浓度减半 (O．5MS)或维持原浓度 (1．0MS)，总氮浓度为 30mM 时，有利于人参细胞皂苷的合成．MS培养基中硝态氮促进皂苷合成，单独使用 硝态氮比与铵态氮混用或铵态氮单独使用更有利于皂苷的合成，皂苷生产量达到最高(158．9mg／L)． 关键词：人参细胞；蔗糖 ；MS浓度 ；氮 中图分类号 ：S567．5 1 文献标识码 ：A 文章编号 ：1004—7999(2O11)02—0089—05 人参 (Panaxginseng)中含有皂苷 、抗氧化物、多肽、多糖 、脂肪酸、乙醇及维生素等成分Ⅱ]，其 中皂苷是 最主要的活性物质口]．栽培人参生长周期长 ，从播种到收获需要 5～7年的时间，且要求精细 的管理 ，生长及 产量受气候 、土壤及病虫害等因素的影响 “；而细胞培养可 以更有效地生产皂苷 ，具有皂苷质量及生产量 易调控 ，不受气候 、地理条件的限制 ，培养条件和过程易优化等特点[2]． 选择适宜培养基是植物细胞培养的首要条件，通过培养基中养分的调节可改变植物细胞生长及物质合 成能力 ]．所以，建立高产、稳产的细胞培养体系是利用细胞工程生产次生代谢产物的关键．在细胞培养过程 中，除了物种本身特性外 ，碳源、氮源等外部因子对细胞生长和次生代谢产物积累的影响也很大．对大多数植 物的细胞培养，培养基 中的蔗糖是主要的碳源及能源 ，其浓度影响细胞生长及次生代谢物 的产量．如紫苏细 胞悬浮培养 中，相对高的蔗糖浓度促进花青素的合成 ]；培养基中氮是细胞培养的主要营养物质，这 已在许 多植物的细胞培养中得 以证实，如美洲商陆的花青苷L7]，止泻木的生物碱[8]，紫草的紫草素[g等的生产．人参 属植物也有许多关于通过改善培养基成分提高有效成分含量的研究报道L2 ，但为了进一步优化人参细胞 培养体系，本文只研究对细胞及皂苷合成有影响的蔗糖 、MS浓度及氮等因素． 1 材料 与方法 1．1 材料 将在长白山区采集 的约 5年生新鲜人参根部泥土洗净 ，在洗衣粉稀释液中清洗 5min后 ，流水冲洗 1O min．在超净工作台内将洗净 的人参根用 70％酒精浸泡 1min，然后用 2 次氯酸钠消毒 30min，最后用无菌 水冲洗 5次．将已消毒的人参根切成 1cm 的小块 ，接种在 MS十2，4一二氯苯氧乙酸 (2，4一D)1．0mg／L+ 激动素 (KT)0．1mg／L+蔗糖 3Og／L+琼脂 6．5g／L的培养基中诱导愈伤组织．将诱导的愈伤组织接人含 5OmL培养基 (Ms+2，4一D 1．0mg／L+ KT0．1mg／L一1+蔗糖 30g／L)的250mL三角瓶中，在转速为 i00r／min的摇床中悬浮培养 ，继代周期为 20d．培养条件为 (25-2)℃，暗培养． 1．2 蔗糖浓度对皂苷生产的影响 在 MS+ IBA 7mg／L+KT0．5mg／L的培养基中加入不同浓度 的蔗糖 (10，3O，50和70g／L)，pH值调 为 5．8．称取继代培养 20d的细胞(鲜重 4g)接入 250mL三角瓶中(含5OmL培养基)，在转速为 i00r／min 的摇床 中培养，培养温度为(25±2)℃，暗培养．20d后调查细胞生长及皂苷含量． 收稿 日期 ：2011一O4一O5 基金项 目：延边大学 “21l工程”3期建设项 目；中韩合作项 目． 作者简介 ：高 日(1982一)，男 ，吉林抚松人 ，延边大学长 白山生物功能因子省部共建教育部重点实验室助教，廉美兰为通