HIV-1外膜蛋白原核表达载体的构建和表达.pdfVIP

第42卷第1期 东北师大学报(自然科学版) V01．42No．1 ofNortheastNormal ScienceEdition) March2010 2010年3月 Journal University(Natural [文章编号]1000—1832(2010)01-0137—04 HIV一1外膜蛋白原核表达载体的构建与表达 赵丽辉1，王会堂1，冀 伟1，田 坚1，王 彬2 (1．长春理工大学生命科学技术学院，吉林长春130022； 2．吉林大学生命科学学院，吉林长春130023) immunodeficiencyvirus，HIV)外膜蛋白，对 [摘 要] 为原核表达免疫缺陷病毒(human HIV一1外膜蛋白的基因进行了修饰，并利用PCR技术克隆env基因，将env基因克隆到原核 blotting检测其表达情况． 表达载体中，利用大肠杆菌表达系统表达外膜蛋白，应用Western B表达质粒，Western 结果表明：酶切鉴定证实正确地构建了pRSET 试验检测结果表明，构建后的env基因能在低温诱导的条件下表达．产物的相对分子质量为 50000和33000，表达的env蛋白具有较好的免疫原性． [关键词]env基因；抗原决定簇；反应原性；低温诱导 78 [学科代码]180·37 [文献标志码]A [中图分类号]Q 人免疫缺陷病毒(humanimmunodeficiency 编码的外膜蛋白既是抗体中和与细胞免疫的主要靶位点，也是HIV病毒的主要抗原．对gpl20和gp41 结构研究的信息和对融膜肽构象的研究结果表明，HIV一1入侵宿主细胞前，gp41三聚体的核心螺旋 复合物构象的进一步改变，最终可导致gp41介导的病毒与细胞膜之间的融合n1． 子的主要区域，这是外膜蛋白上另一个重要的部位，由其诱导产生的抗体能与大多数毒株交叉中和作 界区含有的46个氨基酸残基不仅含有大量的B转角，而且亲水性相当好，加之保守程度高，因而被认为 是高免疫原性区，针对该区域的抗体代表了免疫印迹所能检测的几乎所有gpl20的抗体，而且与感染者 保守性比gpl20强，含有多个B细胞抗原表位，基因序列可以具有更广泛的特异性，可以在HIV检测中 作为一项指标． 本文在此基础上选择了含有较多抗原决定簇的外膜基因env，并构建了原核表达系统，结果表明， 外膜蛋白表达量高，具有良好的反应原性．本实验为研究外膜蛋白与免疫细胞的作用机理及疫苗的研制 奠定了良好的基础． [收稿日期]2009—05—21 [基金项目]国家自然科学基金资助项目． [作者简介]赵丽辉(1966-)，女，博士。副教授，主要从事分子生物学研究． 万方数据 138 东北师大学报(自然科学版) 第42卷 1材料与方法 1．1主要材料 B和表达菌株BI。21(star) 本实验室保存．PGEM—Teasy载体购自Promega公司；原核表达载体pRSET 购自Invitrogen公司．其他常用化学试剂为国产或进口分析纯． 1．2方法 1．2．1env基因片段的扩增 根据env基因全长设计两条引物(引物由大连生物工程有限公司合成)． 上游引物：5 l酶切位点)；下 游引物：5 7(引入NcoI酶切位点)．以携带 580 有HIV一1外膜蛋白的质粒VRl012一env为模板，用所合