柑桔溃疡病菌重组单链抗体的高效表达及活性检测.pdfVIP

卷 期 ! # 微 生 物 学 报 !（）： # %## ’ %#( 年 月 日 $%% $ ! !#$ %’()(*(+$ ,-$ ! )*+*,-*. $%% !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! 柑桔溃疡病菌重组单链抗体的高效表达及活性检测 陈 刚，殷幼平，袁 青，夏玉先，王中康 （重庆大学生物工程学院重庆市基因功能与调控重点实验室 重庆 !%%%1% ） 摘 要：运用 方法扩增利用核糖体展示技术筛选的抗柑桔溃疡病菌（ ， ）的单 I0J !#$%’#( )#*+,( *- C .,$/, KL0 链抗体（ ）基因片段，将单链抗体基因重组到原核表达载体 （ ）中，构建单链抗体高效表达载体 M+6N (/ O:31%7 P （ ） 。再将 （ ） 质粒转化进大肠杆菌 （ ）后诱导表达，并对表达产物进 O:31%7 P 2KL02M+6N O:31%7 P 2KL02M+6N QR$ ):1 行纯化、复性及活性检测。获得了抗KL0 单链抗体的高效表达蛋白，以包涵体形式存在的表达蛋白大小约1$=)7。 包涵体蛋白经过变性、纯化和复性后，初步获得有功能的单链抗体。同时用Q;7+D.* 分析KL02M+6N2(/ 与KL0 RIM 作 用，结果表明复性后的KL02M+6N2(/ 具有较高的亲和力，从而为柑桔溃疡病菌KL0 的免疫诊断和防治研究提供了 新的工具和途径。 关键词： ；表达；包涵体；单链抗体；复性； 分析 KL0 Q;7+D.* 中图分类号： 文献标识码： 文章编号： （ ） S(11 L %%%2#$%( $%% %#2%##2%! 柑桔溃疡病是由地毯草黄单胞杆菌柑桔致病变 行高效原核表达、复性及功能验证。可为柑桔溃疡 种 （ ）引起的一种国 病菌的早期免疫诊断提供新型检测试剂，并为植物 !#$%’#( )#*+,( *- C .,$/, 内外重大检疫性病害，给世界柑桔产业带来了巨大 病害的防治提供新的途径。 经济损失。目前国内外除了烧毁病树外并无其他切 ! 材料和方法 实可行的根除方法，探索柑桔溃疡病的防治新途径 在目前和将来都具有重大意义。 ! ! 材料 基因工程重组单抗兼具治疗和诊断双重功能， ! ! ! 基因操作材料：核糖体展示技术筛选的高 利用抗原E 抗体特异性结合原理，可用于人类疾病、 亲和力、专一性强的单链抗体M+6N (/ 由本实验室构 植物病害的诊断、治疗和预防。单链抗体（ 建和保存， （ ）表达载体为 公司产 B;?@4*