P物质联合表皮干细胞促进糖尿病创面愈合和神经再生的实验的研究.pdfVIP

㈣必燃}Y1 摘要 摘 要 目的；探讨糖尿病大鼠表皮干细胞体外分离培养的方法及其生物特性，观察P 物质联合表皮干细胞对糖尿病大鼠创面愈合与神经再生的影响，为糖尿病创面 的修复提供一种新技术方法，为进一步临床应用奠定实验依据和理论基础。 方法：1)SD大鼠随机分成糖尿病组和正常对照组。糖尿病组采用一次性腹腔 mg／kg)制各糖尿病大鼠模型，正常对 注射链脲佐菌素(streptozocin，STZ，65 照组不作处理。分别取成模糖尿病和正常大鼠背部全层皮肤，采用胰蛋白酶和 乙二胺四乙酸联合消化法分离表皮，Ⅳ型胶原黏附法纯化培养表皮干细胞。倒 置相差显微镜下观察细胞形态变化和细胞克隆形成，细胞计数绘制生长曲线， 析软件测定阳性细胞的积分吸光度(M)值。2)取成功建模的糖尿病大鼠48 只，于背部脊柱两侧以特制打孔器致直径1．8cm全层皮肤缺损创面，每只大鼠四 个创面用随机抽签法随机分为四组(A组：表皮干细胞+P物质组；B组：表皮 干细胞组；C组： P物质组；D组：单纯羊膜对照组)其中A、B两组分别用 羊膜负载的表皮干细胞移植修复；A、 C两组分别于移植后在创周及创中注射 日2次，连用4天。动态观察各组创面愈合情况；创面组织HE染色观察组织学 变化；免疫组织化学I型胶原、III型胶原、PGP9．5和P物质染色观察创面胶原 变化与创面神经再生情况。 结果：1)糖尿病组大鼠表皮干细胞原代贴壁数量较少，其克隆形成率为 创面愈合时间明显缩短，皮肤组织中I型、III型胶原含量明显增多。A、C两组 创面组织中有大量PGP9．5和P物质阳性表达神经纤维再生，部分神经纤维末梢 向表皮延伸接近表皮组织。B、D组仅见创面组织深层有少量PGP9．5和P物质 阳性神经纤维组织表达，未见神经纤维末梢向表皮延伸。 结论：1)在本培养体系条件下能成功的分离培养糖尿病大鼠表皮干细胞，其体 II 摘要 外增殖能力较正常皮肤增殖能力弱，可能是导致糖尿病创面难愈的重要因素之 一。2)联合应用外源性SP和表皮干细胞可有效促进糖尿病创面愈合与神经再 生，为糖尿病创面的修复提供一种新技术方法，为进一步临床应用奠定实验依 据和理论基础。 ． 关键词：P物质，表皮干细胞，创面愈合，神经再生，糖尿病 III Abstract ABSTRACT diabetesmellitusratsskin stemcellsmethodsof explore epidermal Object：To in andits andculturevitro substanceP characteristics，observe separation biological combined、析th stemcellsfortheeffectsofdiabeticdiabetesmellitusrats epidermal wound andnerve anew methods healing regeneration，thisstudyprovidestechology mellitusratswound furture ba