富硒温泉水对增生性瘢痕成纤维细胞增殖的影响.pdfVIP

摘要 哪洲㈣舢0m㈣㈣哪I Y2157843 摘 要 背景： 增生性瘢痕是创伤后组织修复过度的结果，任何创伤的愈合均会伴有轻重 不同程度的瘢痕形成。成纤维细胞是增生性瘢痕形成与增生的主要效应细胞， 烧伤发生后，烧伤创面的成纤维细胞大量增殖，作为肉芽组织的主要成分来填 充伤口，从而促进创面愈合，因此成纤维细胞功能状态是影响增生性瘢痕发生、 发展以及转归的主要因素，是增生性瘢痕组织形成的关键环节。目前增生性瘢 痕的非手术治疗方法主要有加压治疗、激光治疗、硅胶敷贴治疗、放射治疗以 及药物注射治疗等方法，但效果均不佳，因此有必要寻找一种安全、有效、经 济、方便的治疗方法。 在临床实践中发现，富硒温泉水不但能够促进烧伤创面的愈合、提高患者 的免疫力，而且浸浴之后的烧伤患者愈后生长的瘢痕较软，色泽淡，很少影响 肢体功能导致残疾的，但其具体作用机制尚不明确。为了进一步研究富硒温泉 水浸浴抑制瘢痕生长的机制，本实验利用富硒温泉水对体外培养的增生性瘢痕 成纤维细胞进行干预，采用直接计数法和MTT比色法以观察对成纤维细胞增殖 的影响，从而初步探索富硒温泉水抑制瘢痕生长的机制。 目的： 增生性瘢痕最明显的特征就是成纤维细胞的增生，临床试验也证实富硒温 泉水能够有效抑制瘢痕的生长，为进一步明确富硒温泉水治疗增生性瘢痕的作 用机制，我们设计从体外增生性瘢痕患者中取出瘢痕组织进行培养，然后采取 富硒温泉水进行干预，观察其对成纤维细胞增殖的影响，为富硒温泉水抑制瘢 痕增生提供实验依据，初步探讨富硒温泉水浸浴治疗烧伤创面的作用机制。 方法： 选取南昌大学第一附属医院烧伤科住院的整形患者，无菌取其增生性瘢痕 采用改良的组织块进行成纤维细胞培养，检测活性大于90％后继续传代至第3．6 代用于实验。 直接计数法：取生长良好的第3代细胞，制成2×106／ml的细胞悬液，分为 四组，分别为富硒温泉水组(A组)、自来水组(B组)以及蒸馏水组(即空白对照 组)，D组为不加任何溶液的正常培养液组(即正常对照组)。采用24孔板培养， 摘要 每3个孔为同一浓度同一溶质培养基，其中A、B、C三组最终浓度分别为10 ％、20％、30％。在37℃，体积分数为5％的C02条件下培养到预定时间后消化、 收集细胞，采用计数板直接计数。 MTT比色法检测：使用计数板将细胞密度调为5×107／L，接种于96孔培养 板，每孔加入100 h， uL的细胞悬液和100“L的DMEM培养基，继续培养24 待细胞完全贴壁后弃去原液，分别加入含终浓度为10％、20％、30％的富硒温泉 水、自来水及蒸馏水的DMEM培养基(含体积分数10％胎牛血清)，以正常DMEM 培养基培养的细胞作为空白对照组。倒置显微镜下观察富硒温泉水及空白组成 纤维细胞形态及生长情况。将培养的各组细胞放入96孔板后继续放入培养箱中 培养48 h，小心地使用吸液管去除原培养基，每孔加入20此MTT溶液继续培 养4h后弃去培养液，每孔加入150此二甲基亚砜，置微孔振荡器低速振荡10 min，用酶标仪测定490 m吸光度(A)，记录数据并计算细胞生长的抑制率。 结果： 1、在倒置相差显微镜下观察，富硒温泉水培养的细胞数量较少，细胞突起 不同程度的变短或者缺失，细胞质及胞核浓缩，随着温泉水浓度的增加，细胞 存活状况越差， 2、计数的结果 各实验组培养的成纤维细胞计数均少于正常培养基培养组，10％浓度自来水 培养基组和10％浓度蒸馏水培养基组与正常培养基对照组的细胞增殖曲线走势 基本趋同，富硒温泉水组及20％、30％自来水和蒸馏水组对成纤维细胞的生长均 有显著增殖效应；富硒温泉水组与正常培养基组比较细胞数，差异有显著意义， P0．05。 3、MTT结果 不同浓度的富硒温泉水、自来水、蒸馏水均对成纤维细胞的增殖有抑制作 用，以富硒温泉水培养基的抑制作用最明显，且随浓度的升高，抑制率增大。 结论： 富硒温泉水在一定浓度范围内剂量依赖性地抑制人增生性瘢痕成纤维细胞 的增殖。