氨丙基紫精介导硝酸还原酶电极检测硝酸根离子.pdfVIP

第四届全国环境化学学术大会论文集(上册) 氨丙基紫精介导硝酸还原酶电极检测硝酸根离子 于洪斌，全燮 (工业生态与环境工程教育部重点实验室，大连理工大学环境与生命学院，辽宁，大连，116024) 7．0的磷酸盐缓冲溶液中， 摘要：将溶有硝酸还原酶的壳聚糖溶液滴涂于玻碳电极表面制得酶电极。在pH 考察了以氨丙基紫精(N，N’--(3一氨丙基)．4，4．．联吡啶(APD))为电子媒介体，电化学方法检测硝酸根离子的 可行性。结果表明，AID在壳聚糖包敷的硝酸还原酶电极表面可以进行准可逆的电子传递，并在硝酸根离 子的电化学检测中，起到了很好的电子媒介作用。最后，论文展望了酶电极传感器的发展方向，提出了新 的硝酸盐电化学生物传感器的研究思路。 关键词：硝酸还原酶；壳聚糖；N,N(3-氨丙基)．4，4i联吡啶(APD)；循环伏安 O引言 水体遭受硝酸盐污染，不仅可能导致富营养化，破坏生态平衡，而且硝酸根的还原产物 亚硝酸根对人体具有致癌作用和引起高铁血红蛋白症等危害。所以，水体中硝酸根离子的检 测方法研究受到了广大科研人员的重视。Moorcrofl等人对此做了比较详细的综述lJJ，检测 方法主要有光谱法、色谱法和电化学方法等。而利用硝酸还原酶，制备电化学生物传感器是 研究的热点之一，其中，多数研究是以甲基紫精作为电子媒介体。而以带有氨基功能基团的 紫精作为电子媒介的相关研究却报道很少。本文研究了以APD作为电子媒介体的可行性， 并考察了壳聚糖包敷硝酸还原酶电极对硝酸盐的伏安响应。 1实验部分 1．1试剂与仪器 硝酸还原酶(EC I．6．6．2，Sigma)；壳聚糖(脱乙酰度92％，厦门星隆达化学试剂有 限公司)；高纯氮气(99．999％)；APD(参照文献【2】中的方法合成)。其他试剂均为分析 纯，实验用水为Milli—Q纯水机制得的超纯水。 玻碳电极(天津兰力科化学电子高技术有限公司)直径3171in。使用CHl650B电化学分 析仪(上海辰华仪器公司)进行电化学测量，以酶电极为工作电极，铂片为对电极，饱和甘 min的O．1 7．0)。 汞电极为参比电极。电解液为通高纯氮除氧20 M磷酸盐缓冲溶液(pH 1．2酶电极制备 将玻碳电极依次用1．0、0．3和0．05 lam的A1203浆抛光至镜面，然后分别在乙醇、1：l 硝酸和超纯水中超声清洗5min，晾干。将等体积的0．5％壳聚糖(1％的醋酸溶液)与含有 25mU硝酸还原酶的磷酸盐缓冲溶液(pH7．0)迅速混合后取lO山，滴涂于抛光的玻碳电极 表面，412下缓慢挥发至干，即得酶电极。 V啦／mV忱sd应 俨／m吩也 图1．APD在玻碳电极(A)和酶电极(B)上峰电流与扫描速度平方根的关系，APD为ImM，插图为循环 mV·s一。 伏安图，由内到外扫速依次为5，10，25，50，100，200，400 59 第四届全国环境化学学术大会论文集(上册) Scanrate／mV 心。／ntvl 图2．酶电极的循环伏安响应，插图由内要0外扫速依 图3．酶电极对硝酸根的伏安检测，插图由上至 次为25，50，100，200，400mV·s．1。 下NO；浓度依次为0，O．1，0．3，0．5，1，2，3， 4ram，扫速5mV．S．1。 2结果与讨论 2．1APD的电化学行为 由图l(A)所示，APD在玻碳电极表面呈现出典型的紫精类电子媒介体的两电子传递过 程，且循环伏安阳极峰电流(k)与阴极峰电流(五)近似相等以及峰电位不随扫速增加而 改变，由此可知，APD在玻碳电极表面进行的是几乎可逆