学习植物组织培养技术.docVIP

[实习1) 学习植物组织培养技术 教学目标 1．知识方面 (1)理解植物组织培养技术的基本原理、目的要求和方法步骤。 (2)初步掌握植物组织培养的操作技能。 2．态度观念方面 对学生进行科学方法的训练及科学素质的培养。 3．能力方面 (1)培养学生的动手、观察、实验及分析问题、解决问题的能力。 (2)培养学生的创新实践能力。 实习原理 植物细胞具有全能性。在无菌条件下，把植物体的器官或组织片段切下来，接种在适当的人工培养基上进行离体培养，这些器官或组织的细胞就会经过脱分化和再分化的过程，逐渐产生出植物的各种组织和器官，进而发育成一棵完整的植株。用于离体培养的植物器官或组织片段，叫外植体。 在人工合成的培养基中，包含有植物生长和发育所需要的全部营养成分，包括矿质元素(分为大量元素和微量元素)、蔗糖、维生素、植物激素和有机添加物。培养基中的大量元素有氮、磷、钾、钙、硫、镁等。氮是蛋白质的重要组成成分，对离体组织的营养至关重要。其他大量元素也是离体组织正常生长所必需的。培养基中的微量元素有铁、铜、锌、锰、钼、硼、碘、钴、氯、钠等，如果缺少了这些微量元素，植物就会生长不良。培养基中的蔗糖是离体组织赖以生长的重要营养成分。维生素能够明显促进离体组织的生长。植物激素如生长素和细胞分裂素等，是植物细胞脱分化和再分化必不可少的调节物质。有机添加物如甘氨酸等对植物细胞和组织的分化有一定的促进作用，琼脂使培养基呈固体状态，有利于外植体的生长。 植物组织培养的方法步骤 在进行植物组织培养工作之前，首先应对工作中需要哪些最基本的设备条件有全面的了解。这主要有三个方面的准备：实验室设计、基本设备及操作技术。 一、实验室设计：实验室由三部分组成：准备室(培养器皿的清洗；培养基的配制、分装、包扎和高压灭菌)、无菌室(无菌操作——材料的表面灭菌和接种)、培养室(放置培养物)。 二、基本设备：准备室的主要设备及用具(电冰箱、高压灭菌锅、电炉、不锈钢锅、水槽、大桌子、玻璃橱、搁架、精密pH试纸、托盘天平、培养器皿、分装培养基的器具、试剂瓶、移液管、量简、烧杯、容量瓶、各式洗瓶刷、胶手套和线手套、大型塑料篮)；无菌操作室的主要设备及用具(超净台或接种箱、小搁架、医用小平车、无菌操作用的器具、烧杯或广口瓶、玻璃棒、常备的消毒灭菌药剂，毛刷、无菌水)；培养室的主要设备及用具(培养架与灯光、配电板、控温仪、温度湿度计)。 三、操作技术：有了良好的实验室和基本设备之后，就应当学习组织培养的操作技术，并在实际工作中经过反复练习而熟练掌握。 1．洗涤。 植物组织培养最重要的，也是最基本的要求，就是各项操作都应从无毒害、无污染的培养环境来考虑。培养过程中最经常最大量的工作之一，是洗涤培养瓶及其他常用器皿。最常用的洗涤助剂就是家庭用的洗衣粉及肥皂两种，备一点去污粉也有些用处。洗好的瓶子应透明锃亮，内外壁水膜均一，不挂水珠，即表示无污迹存在。 2．灭菌。 灭菌工作是极其重要的。初学植物组织培养技术的人，首先要建立有菌和无菌的概念，即必须明确无误地认识和了解哪些东西是有菌的，哪些东西及其一部分是无菌的，否则工作中出了问题，也不知道毛病出在哪一个环节上。 有菌的范畴：凡是暴露在(未经处理的)空气中的物体，曾经接触过自然水源的物体，至少它的表面，毫无例外都是有菌的。它的内部在未经证实之前，也应以有菌物体看待。 无菌的范畴：经过高温灼烧或蒸煮过后的物体，经其他物理或化学灭菌方法处理过后的物体，是无菌的。 常用的灭菌方法可分为物理方法和化学方法两大类。物理方法如干热(烘烤和灼烧)、湿热(蒸煮或加压蒸煮)、射线处理、微波处理、清洗和大量无菌水冲洗等技术措施。化学方法如使用灭菌剂——升汞、福尔马林、双氧水、来苏水、高锰酸钾、漂白粉、次氯酸钠、抗菌素、酒精等等。这些方法和药剂要根据工作中的不同材料、不同目的适当选用。 (1)培养基的灭菌 培养基在制备过程中带有各种杂菌，分装后应立即灭菌，至少应在24h之内完成灭菌工序。新制备分装好的培养基，常规方法是放人高压灭菌锅内加热灭菌。 (2)不耐热的物质将采用过滤灭菌 一些生长因子，如玉米素、脱落酸、尿素和某些维生素是不耐热的，不能用高压灭菌处理。通常采用过滤灭菌方法。 (3)玻璃器皿及耐热用具等可采用干热灭菌 干热灭菌是利用烘箱加热到160～180℃的温度来杀灭微生物。由于干热灭菌能源消耗大，费时间，这一方法并不常用，尽可能用高压灭菌来取代它。如进行快速繁殖可以完全不用干热灭菌法。 (4)用于无菌操作的器械采用灼烧灭菌 在准备做无菌操作时，把解剖刀、镊子、剪刀等浸入质量分数为95％酒精中。用之前取出，在酒精灯焰上灼烧灭菌，然后架