P(GMA-co-MMA)磁性复合微球的制备及木瓜蛋白酶的固定化.pdfVIP

助 锨 材 料 任 琦，陈秋云，倪忠斌，陈明清 (江南大学化学与材料工程学院，江苏无锡214122) 摘 要： 在改性Fe。O；纳米颗粒存在的条件下用乳 酶的酶学性质。 液聚合法制备了表面带有环氧基的聚甲基丙烯酸缩水 2 实 验 甘油酯一聚甲基丙烯酸甲酯P(GMA—co-MMA)磁性复 合微球，对其粒径、形态、磁含量、磁性质进行了表征； 2．1仪器与试剂 在复合微球表面引入氨基后，以戊二醛为交联荆，固定 木瓜蛋白酶，探讨了给酶量、戊二醛浓度对固定化酶活 北京瑞利分析仪器公司制造；透射电子显微镜 性的影响，考察了酶学性质。结果表明，该复合微球的 平均粒径为170nm，具有超顺磁性，磁含量可以控制在TGA／SDTA85e型，瑞士MettlerToledo公司；磁强 20％～50％之间；当戊二醛浓度为5％，给酶量为计(VSM)，EV7型，美国ADE公司。 200mg时，达到固定化酶最适使用条件，其在热、酸碱 甲基丙烯酸缩水甘油酯(GMA)，AcrosOganics 和操作稳定性上均优于游离酶。 公司，直接使用；甲基丙烯酸甲酯(MMA)，国药集团化 关键词： 甲基丙烯酸缩水甘油酯；乳液聚合；磁性复 学试剂有限公司，用Al。0。柱除去阻聚剂；过硫酸钾 合微球；固定化酶 (KPS)，国药集团化学试剂有限公司，重结晶后使用； 中图分类号：063；061 文献标识码：A 二乙烯苯(DVB)，工业级，直接使用；三氯醋酸 文章编号：1001—9731(2011)04—0730—04 1 引 言 酶，国药集团化学试剂有限公司，直接使用。 磁性复合微球不仅有聚合物的特性，同时具有磁 2．2 P(GMA-eo-MMA)磁性复合微球的制备 性，可在外加磁场的作用下实现有效的移动，用于快速 分离，当撤去外加磁场微球可重新分散，因此其常被用 SDS的水溶液中，将混合溶液移人装有搅拌器、回流冷 作高效载体，在固定化酶[1’2]、蛋白质分离[3“1等生物领 域中广泛应用口’6]。传统固定化酶主要有物理吸附 加入含有2．19MMA，0．69GMA与0．39DVB的混合 法[71和共价结合法[8，9]，物理吸附法是通过氢键、静电 等物理作用力将酶固定于不溶性载体上，但是，酶和载 KPS，反应24h。对产物进行磁分离，用水洗涤3次，得 体间的吸附力较弱，当体系的pH，盐浓度及温度变化 到P(GMA-co-MMA)磁性复合微球。 时容易脱吸附。共价结合法是通过在固相载体表面引 2．3复合微球的表面改性 入羟基‘1…、氨基‘11]、羧基‘12。、羰基‘131等活性基团，和酶 分子之间形成化学共价键，使酶固载，不易脱落，因此 共价结合法是目前最常用的方法。在磁性复合微球的 中，在60℃下搅拌反应6h，对环氧基团进行改性，转变 研究中，磁含量是衡量其特性的重要性质之一，不同磁 为氨基，反应结束后产物用大量去离子水冲洗至中性。 含量的复合微球对外加磁场显示出不同的磁响应速 根据文献[15]的方法，采用线性电位滴定法测定表面 度，因此制备磁含量高且可控的磁性复合微球是一个 氨基含量。 值得研究的课题。 2．4 固定化木瓜蛋白酶的制备 本文在制备改性Fe。o。纳米颗粒的基础上[1引，通 在氨基磁性复合微球中加入5％的戊二醛溶液， 过甲基丙烯酸缩水甘油酯(GMA)和甲基丙烯酸甲酯 室温振荡交联2h，磁分离，水洗去过量的戊二醛，再用 (MMA)的乳液聚合制备磁含量可控的复合微球，对其lmol／L的磷酸缓冲液洗涤3次。取上述磁性复合微 表面进行化学改性引入氨基，并通过共价偶联剂戊二 醛与酶分子的希夫碱