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第六章 脱毒苗的获取及繁育技术 脱毒苗的获取及繁育技术 脱毒材料的获取 花卉病毒的检测规程 无毒体系的保持 脱毒材料的获取 热处理脱毒 茎尖脱毒 抗病毒药剂处理脱毒 热处理脱毒 带毒植株经高温处理后，病毒浓度会降低 一种解释认为，由于高温，寄主细胞快速分裂，加剧了寄主细胞与病毒粒子对核酸和蛋白质合成的竞争，打破了病毒粒子合成与降解的平衡，从而减少了病毒粒子含量。 另一种解释认为，在高温情况下，用于保护病毒核酸的外壳蛋白的亚基会变得不牢固，并出现暂时的裂缝，易使病毒核酸被降解，从而钝化了病毒活性并降低了病毒含量。 热处理脱毒 热处理的植株需含丰富的碳水化合物，可在事前对植株进行缩减。 处理方法：把适当的材料移入一个热处理室或光照培养箱中，在35—40℃高温下，根据种类特征和材料情况处理数天到数周不等。 可采用变温处理，即昼夜或隔日高低温交替处理的方法，来提高脱毒成功率。 热处理脱毒 局限性 一方面并非所有的病毒都对热处理敏感，对大多数病毒而言，热处理只能部分降低植株内病毒的含量，故单独通过热处理难以获得无毒材料。 另一方面热处理时间过长，会造成植株代谢紊乱，影响成活率，加大了品种变异的可能性。 茎尖脱毒 分生组织中不含病毒可能跟以下几点有关 代谢活性高 病毒的增殖依赖于寄主的代谢，由于分生组织具有很高的代谢活性，病毒无法控制寄主的代谢机制。 无维管组织 病毒是通过维管组织在寄主的组织中进行快速扩散的，由于分生组织中无细胞分化，那些存在于韧皮部的病毒(如PLRV)就不可能侵染分生组织，而侵染非韧皮部病毒也只能通过胞间连丝进行细胞间传播，但它的速度很慢，难以侵染快速分裂的茎尖细胞。 高激素浓度 植物的分生组织比其他组织的植物激素浓度高，可以抑制病毒的增殖。 具体过程（以香石竹为例） 影响茎尖脱毒的因素 培养基 选择正确培养基，可以显著提高获得完整植株的成功率。 茎尖剥离体的大小 在最适培养基条件下，茎尖剥离体的大小对其存活率的影响较大。一般被剥取的茎尖越大，越容易产生再生植株。但植株茎尖的脱毒效率与其大小呈负相关，因此被剥取的茎尖应该小到足以能够脱除病毒，但又能够发育成为一个完整的植株。 培养条件 茎尖的生理状态 茎尖最好要从活跃生长的芽上切取 取芽的时间 抗病毒药剂处理脱毒 茎尖培养结合抗病毒剂处理，是观赏花卉脱毒种苗规模化生产的较好选择 用于植物脱毒的抗病毒药剂主要包括嘌呤和嘧啶类似物、氨基酸、抗生素等，这些药剂可在某种程序上抑制植物体内或离体叶片内病毒的合成，但尚不能完全抑制病毒使之失活 在生产中使用病毒唑处理时特别应注意以下问题： 病毒唑浓度 处理时间 茎尖大小 变异测定 花卉病毒的检测规程 鉴别寄主检测法 鉴别寄主的栽种 机械接种 症状观察 ELISA检测 无毒体系的保持 原原种的无毒保持 原原种的保持与扩繁可通过组培方式 也可通过栽培方式进行 原种的无毒保持 采穗圃的无毒保持 无毒优质种苗生产程序（图） 原原种的无毒保持 通过栽培方式进行应注意 防虫温室 单盆定植 器具消毒 清洁卫生 定期喷药 病毒检测 原种的无毒保持 原种在保持条件上，与原原种基本相同 (如仍需防虫温室、基质灭菌、器具消毒、清洁卫生、定期药剂防除等)。 仍有不同之处 单系种植 病毒抽测 注：原种的繁殖不能无限制地进行，否则会造成植株退化，生活力下降。 采穗圃的无毒保持 采穗圃是整个无毒体系的主体之一，也是实现商品价值的重要环节。 离地栽培 适当稀植 母本植株更新与基质消毒 定期喷药 病毒抽测 香石竹脱毒的操作程序 无毒优质种苗生产程序 * * *